Edição genética em neuroblastoma por CRISPR/Cas9 para validação de alvo envolvido na dor e inflamação

• Processo: 23/10975-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Fixação de Jovens Doutores
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2023
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Acordo de Cooperação: CNPq
• Pesquisador responsável: Ana Marisa Chudzinski-Tavassi
• Beneficiário: MARIANA BARBOSA DE SOUZA RIZZO
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 23/01532-8 - Edição genética em neuroblastoma por CRISPR/Cas9 para validação de alvo envolvido na dor e inflamação, AP.R
• Assunto(s): Proteína 9 associada à CRISPR Repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente espaçadas Dor nociceptiva Neurônios Peptídeos Venenos Terapia de alvo molecular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cas9 | Crispr | dor nociceptiva | neurônios | peptídeos | Validação de alvos moleculares | venenos | Alvos Moleculares

Resumo

INTRODUÇÃO: A dor é um problema mundial. A identificação e validação de alvos que afetam a dor são fundamentais para o desenvolvimento de intervenções mais eficazes e seguras. Os venenos são ricos em compostos bioativos e podem ser ferramentas valiosas para explorar novos alvos moleculares. Para estudos de dor, caracterizamos um modelo para avaliar o efeito antinociceptivo de compostos em neurônios sensoriais humanos derivados de células SH-SY5Y, utilizando uma matriz extracelular glicada (ECM-GC) como estímulo. Os peptídeos derivados do veneno, E8, D3, P4 e C-ambly induzem fenótipo antinociceptivo em neurônios, diminuindo a liberação de substância P e aumentando a liberação da ²-endorfina. Uma análise de quimioproteômica e bioinformática nos levou a identificar possíveis alvos específicos de peptídeos que participam da inibição da dor e da inflamação, e esses alvos promissores serão validados nesse modelo. OBJETIVOS: Validar alvos terapêuticos envolvidos na dor e inflamação por meio do nocaute genético. MÉTODOS: O nocaute dos genes alvos será realizado na linhagem celular SH-SY5Y utilizando CRISPR/Cas9. O impacto funcional de genes deletados será investigado usando abordagens de biologia molecular e celular. RESULTADOS ESPERADOS: Esperamos observar como os alvos contribuem para a dor e resposta inflamatória das células e sua relevância para a ação dos peptídeos antinociceptivos/anti-inflamatórios, o que potencialmente revelará um novo peptídeo alvo específico para ser utilizado no controle da dor e da inflamação.