Efeito de células-tronco triplamente condicionadas por sobre-expressão de bmp-9, cultivo sobre microtopografia e fotobiomodulação na regeneração óssea

• Processo: 23/12491-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Fixação de Jovens Doutores
• Vigência (Início): 01 de setembro de 2023
• Vigência (Término): 31 de agosto de 2024
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia - Cirurgia Buco-maxilo-facial
• Acordo de Cooperação: CNPq
• Pesquisador responsável: Adalberto Luiz Rosa
• Beneficiário: Hiskell Francine Fernandes e Oliveira
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto (FORP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 23/01309-7 - Efeito de células-tronco triplamente condicionadas por sobre-expressão de BMP-9, cultivo sobre microtopografia e fotobiomodulação na regeneração óssea, AP.R
• Assunto(s): Células-tronco mesenquimais Terapia a laser de baixa intensidade Osso e ossos Terapia baseada em transplante de células e tecidos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bmp-9 | células-tronco mesenquimais | Condicionamento celular | Fotobiomodulação | Superfícies microtopográficas | tecido ósseo | Terapia Celular

Resumo

Existem evidências de que condicionamentos de células-tronco mesenquimais (MSCs) aumentam sua eficácia nos procedimentos de medicina regenerativa. Estudos têm demonstrado que o emprego isolado de diferentes estratégias estimula a diferenciação celular e, em última análise, a formação tecidual. Entre elas, o aumento da expressão ou da exposição de MSCs a fatores de crescimento, modificações da superfície de cultivo e a terapia com fotobiomodulação (FBM). Nesse sentido, nossa hipótese é que a combinação desses estímulos resulta em efeito sinérgico sobre MSCs, capazes de regenerar o tecido ósseo. Portanto, o objetivo deste estudo é avaliar o efeito da terapia utilizando injeção local de MSCs triplamente condicionadas por (1) edição gênica para sobre-expressar BMP-9, (2) cultivo sobre superfícies com microtopografia e (3) FBM com laser sobre a regeneração óssea. Para isso, uma linhagem imortalizada de MSCs derivadas de medula óssea serão geneticamente editadas para sobre-expressar BMP-9 (MSCsBMP-9+) pelo sistema CRISPR/Cas9 (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats-associated protein 9). MSCsBMP-9+ cultivadas sobre superfícies com microtopografia serão avaliadas pela expressão proteica de BMP-9, expressão de genes da via das BMPs e da diferenciação osteoblástica. Essas células serão injetadas na concentração de 5´104 células/50 mL de PBS em defeitos de calvária de ratos criados 2 semanas antes da injeção. A FBM será aplicada imediatamente, 48 e 96 h após a injeção (808 nm; 40 mW; 1,42 W/cm2; 4 J/cm2; 3 s; 0,12 J/ponto; 0,028 cm2) e em quatro pontos (um no centro e três equidistantes, ao redor do defeito). A formação óssea será avaliada por microtomografia computadorizada in vivo imediatamente, 2 e 4 semanas após a injeção e por análise histológica ao final de 4 semanas. Os dados quantitativos serão avaliados quanto à aderência à curva normal e homogeneidade de variâncias para selecionar os testes estatísticos adequados (nível de significância de 5%). Os resultados desse estudo poderão contribuir para o estabelecimento de novos tratamentos, baseados em conceitos de terapia celular, para promover a regeneração óssea em sítios desafiadores, com aplicações nas áreas de Cirurgia Buco-Maxilo-Facial, Periodontia, Implantodontia e Ortopedia.