Efeito da inibição da quinase FAK na via de sinalização ATM/Chk2/p53/p21 durante a resposta ao dano no DNA em cardiomiócitos tratados com doxorrubicina

• Processo: 23/16443-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2024
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
• Pesquisador responsável: Aline Mara dos Santos
• Beneficiário: Lara Basseres Novais
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Cardiotoxicidade Doxorrubicina p53 Transdução de sinais
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: cardiotoxicidade | Chk2 | Doxorrubicina | p21 | p53 | Quinase de adesão focal (FAK) | Resposta ao dano de DNA | Via ATM | Sinalização celular

Resumo

A cardiotoxicidade induzida pela doxorrubicina é um dos efeitos colaterais mais importantes deste quimioterápico, provocando cardiomiopatias em pacientes oncológicos. A doxorrubicina apresenta como mecanismo de ação a produção de radicais livres e inibição da topoisomerase II, o que resulta em sucessivas quebras no DNA, desencadeando estresse genotóxico que pode culminar na morte do miócito cardíaco. Nesse contexto, estudos mostram que a proteína FAK (quinase de adesão focal) tem um efeito pró-sobrevivência celular e é translocada para o núcleo durante estresse genotóxico de cardiomiócitos, tendo um papel na regulação da degradação de p53. Esses dados indicam que a FAK pode ter um papel relevante na sinalização de resposta ao dano ao DNA (DDR) em miócitos cardíacos, porém ainda é necessário elucidar os mecanismos finos da atuação da FAK nessas vias. Neste projeto, propomos estudar a relação da FAK com os componentes da via ATM/Chk2/p53/p21, uma das mais importantes vias de sinalização de resposta ao dano de DNA em cardiomiócitos. Por meio da inibição de FAK, concomitante ao tratamento com doxorrubicina, serão investigadas: (i) a modulação do número de sítios de c-H2AX e alterações na localização subcelular das proteínas ATM, Chk2 e p53, bem como sua colocalização com FAK, por ensaios de microscopia de super resolução por iluminação estruturada (SR-SIM); (ii) alterações na expressão e/ou ativação de ATM, Chk2, p53 e p21 por western blotting e qPCR; e (iii) a modulação da viabilidade celular por ensaios de MTT frente ao tratamento proposto. Dessa forma, busca-se determinar qual o impacto da FAK nesta importante via de sinalização que opera durante a resposta ao dano no DNA.