O canabidiol atenua os efeitos cognitivos de longo prazo produzidos pela via de sinalização mediada por exossomos derivados de células neurais infectadas com SARS-CoV-2: padronização de um modelo cognitivo de COVID longa.

• Processo: 23/05979-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2024
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2027
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Farmacologia - Neuropsicofarmacologia
• Pesquisador responsável: Alline Cristina de Campos
• Beneficiário: Bruno Lemes Marques
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 24/18340-7 - Vesiculas extracelulares derivadas de células infectadas por SARS-CoV2 induzem alterações neuroplasticas em culturas neuronio-gliais derivadas do neuroepitélio olfativo humano., BE.EP.DR
• Assunto(s): Canabidiol Exossomos Hipocampo Neuroproteção
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Canabidiol | COVID longa | Exossomos | Hipocampo | Neuroproteção | Farmacologia

Resumo

Cerca de um terço dos pacientes com COVID-19 podem desenvolver problemas psiquiátricos e neurológicos até 6 meses após a infecção, um fenômeno conhecido como COVID longa. Esses sintomas incluem questões cognitivas, perda de memória, sensações de formigamento, tontura, sensibilidade à luz e ao ruído, e disfunção autonômica, independentemente da gravidade da doença respiratória. Exossomos, biovesículas nanométricas, desempenham um papel na disseminação de partículas virais e podem promover alterações neuroinflamatórias e neurodegenerativas dependendo do seu conteúdo. Estudos recentes mostram que o canabidiol (CBD), derivado da Cannabis sativa, pode reduzir a neuroinflamação e as alterações cognitivas em modelos animais de doenças neurodegenerativas. Considerando que a inflamação contínua pode estar por trás dos sintomas neurológicos da COVID longa, o CBD pode oferecer proteção neuroprotetora e aliviar esses sintomas, possivelmente influenciando a carga exossomal liberada durante a infecção por SARS-CoV-2. Nesse sentido, este estudo investigará se exossomos são cruciais para a neuroinvasividade e os déficits cognitivos vistos na síndrome neurológica causada pela COVID-19. Além disso, avaliará se o tratamento com CBD pode atenuar esses efeitos, reduzindo o conteúdo viral e pró-inflamatório dos exossomos. Primeiro, investigaremos o impacto de exossomos de células de neuroblastoma humano (SH- SY5Y) infectadas com SARS-CoV-2 sobre células SH-SY5Y in vitro. As células SH-SY5Y serão infectadas com o vírus SARS-CoV2 P1, e os exossomos isolados do sobrenadante via ultracentrifugação. Os exossomos serão avaliados através da análise de NanoTracking (NTA), Microscopia Eletrônica de Transmissão (TEM) e Sequenciamento de micro-RNA, onde analisaremos o tamanho, concentração, morfologia e conteúdo dessas vesículas. Após a caracterização, células SH serão incubadas por 24h com exossomos isolados de células SH infectadas por SARS-CoV-2 ou MOCK. A proliferação e viabilidade celular serão avaliadas através dos ensaios de MTT (3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-brometo de difeniltetrazólio) e BrdU (5-Bromo-3-deoxiuridina). Em um segundo experimento, para investigar se exossomos de neuroblastoma humano infectados com Sars-CoV-2 afetam a cognição e se o CBD é capaz de reverter tais alterações avaliadas através do Teste de Labirinto de Barnes, Teste de Reconhecimento de Novo Objeto (NORT) e Teste de Localização de Objeto (OLT). Posteriormente estes animais serão eutanasiados e terão seus cérebros removidos para a realização de análises de degeneração neuronal por FluoroJadeC, Western Blotting (IL- 1, IL-6-, TNF-±, IL-10, TGF-², CB1, CB2, PKA, ERK, PI3K, AKT, GSK-3², BCL- 2, Caspase 3) e ELISA de citocinas (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-gama e TNF-alfa). O tratamento com CBD será diário, por 7 dias. Por fim, para entender o papel das células microgliais no potencial efeito neuroprotetor do CBD em déficits cognitivos causados por exossomos de neuroblastomas infectados com Sars-CoV-2, animais transgênicos TMEM19-2A +CreERT2 x Ai39 (RCL-eNpHR3.0/EYFP) serão manipulados manipulação optogenéticamente tornando viável a ativação seletiva de células microgliais do sistema nervoso desses animais e, assim, verificar a contribuição destas células nos efeitos positivos do CBD.