Correlação entre ensaios in vitro e ensaios in vivo: busca de abordagens no estudo de venenos ofídicos que dispensem o uso de animais seguindo o princípio dos 3R's

• Processo: 24/00382-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2024
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: Anita Mitico Tanaka-Azevedo
• Beneficiário: Lidia Jorge Tasima
• Supervisor: Juan Calvete
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Instituto de Biomedicina de Valencia (IBV), Espanha
• Vinculado à bolsa: 21/04287-9 - Correlação entre ensaios in vitro e ensaios in vivo: busca por abordagens no estudo de venenos de serpentes que dispensem a utilização de animais seguindo o princípio dos 3R's, BP.DR
• Assunto(s): Proteômica Serpentes
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: proteômica | Serpentes | venômica | Proteômica

Resumo

O estudo da variação e controle de qualidade de venenos ofídicos tem sido objeto de intensa investigação, dada a sua utilização na produção de antivenenos e na busca de novos produtos de interesse biotecnológico. Para tanto, diversas atividades biológicas de venenos são estudadas utilizando métodos in vivo e in vitro. Porém, reconhece-se que existem alguns problemas relacionados aos atuais testes in vivo: é necessário um grande número de animais, demorados, caros, sem correlação com envenenamento e terapia em humanos e do ponto de vista ético. Dada a importância destas questões, o desenvolvimento de métodos alternativos para estudos e controle de qualidade de venenos e antivenenos tem um forte incentivo e há um esforço da comunidade científica para seguir o conceito dos 3 R's (Reduzir, Refinar e Substituir) em relação aos ensaios com animais. Embora o uso de animais para avaliar a eficácia dos soros antivenenos ainda seja essencial, metodologias que possam substituir os ensaios in vivo em pesquisas relacionadas aos efeitos do veneno não apenas reduziriam o uso de animais, mas também permitiriam padronização e melhor comparação entre os resultados obtidos em diferentes pesquisas. Pensando nisso, o objetivo deste projeto é buscar metodologias de análise in vitro da atividade venenosa de diferentes serpentes que apresentem resultados comparáveis aos testes in vivo, a fim de encontrar alternativas ao uso de animais em metodologias de laboratório. Para isso, foram utilizados seis pools de venenos de serpentes dos gêneros Bothrops, Crotalus, Lachesis, B. erythromelas, B. leucurus e B. atrox. Os resultados obtidos até o momento mostraram fortes correlações entre os resultados da dose letal 50% e a atividade da Fosfolipase A2 e atividades caseinolíticas. Fortes correlações foram encontradas entre atividade miotóxica e atividade LAAO, hialuronidase, antibacteriana, citotóxica e coagulante. A atividade edematogênica apresentou boas correlações com atividades LAAO e citotoxicidade em duas linhagens. Ao analisar apenas com venenos botrópicos, algumas correlações são adicionadas à lista de experimentos com boa correlação. Conhecer a quantidade de cada família de proteínas presente no veneno de cada grupo de serpentes pode ser uma forma de prever as manifestações clínicas presentes no caso de envenenamento ofídico e também a intensidade desses sintomas em uma espécie específica de serpente. Portanto, a utilização de metodologias para análise da composição desses venenos, como a proteômica, pode apresentar resultados interessantes para o projeto proposto.