Análise da expressão gênica em embriões injetados com a mutação ativadora do IL7R

• Processo: 24/01772-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2024
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Embriologia
• Pesquisador responsável: Maraysa de Oliveira Melo Stein
• Beneficiário: Mariana de Filippi Oliveira
• Instituição Sede: Centro Infantil de Investigações Hematológicas Dr Domingos A Boldrini (CIB). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Hematopoiese Leucemia Peixe-zebra Biologia do desenvolvimento
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Hematopoiese | Il7R | Leucemia | Zebrafish | Biologia do desenvolvimento

Resumo

A leucemia linfoblastica aguda de células T (LLA-T), é uma neoplasia maligna que representa 15% de casos em crianças e 25% em adultos e, se caracteriza pela proliferação descontrolada de células linfóides do tipo T. Dos casos descritos de LLA-T na literatura, 25% deles estão envolvidos com a via do IL-7R. Pesquisadores do Boldrini descobriram, em amostras pediátricas de pacientes com LLA-T, que a LLA é provocada por uma mutação de ganho de função no gene do IL-7R. A maioria dos pacientes diagnosticados apresentaram inserção de cisteína no domínio justamembrana na porção extracelular do receptor, gerando um homodímero constitutivamente ativo. Com o avanço da biologia molecular e dos estudos ômicos, muitas mutações vem sendo descritas, no entanto, pouco se sabe sobre a função biológica dessas alterações e os modelos in vivo podem contribuir para esse entendimento. Pensando nisso, objetivo desse projeto é caracterizar a expressão de genes relacionados ao desenvolvimento do sistema hematopoiético na presença da mutação ativadora do IL7R de humanos (hIL7Rmut). Utilizaremos o modelo zebrafish (Dario rerio) por apresentar características importantes como prole numerosa, embriões transparentes, desenvolvimento rápido, facilidade de manutenção e pela hematopoiese e vias de sinalização serem altamente conservadas quando comparadas com humanos. Os embriões serão injetados com constructos contendo um promotor ubíquo ou um promotor específico de células tronco hematopoiéticas dirigindo a expressão hIL7Rmut fusionado ao GFP e seus respectivos controles, expressando apenas a proteína GFP. Iremos analisar por RT-PCR a expressão diferencial de genes relacionados ao sistema hematopoiético comparando controle com a presença do IL7Rmut e iremos validar os achados por hibridização in situ. A geração e consolidação de modelos in vivo fornecerá suporte para pesquisas futuras destinadas ao estudo da biologia do câncer e da função desses mutantes durante o desenvolvimento embrionário.