Avaliação da solubilidade e estabilidade de uma serinoprotease recombinante de Crotalus durissus collilineatus em suas formas PEGlada e não PEGlada

• Processo: 24/02846-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2024
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2025
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Farmácia - Análise Toxicológica
• Pesquisador responsável: Eliane Candiani Arantes Braga
• Beneficiário: Isadora Lino Mendes
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/11936-3 - Centro de Ciência Translacional e Desenvolvimento de Biofármacos, AP.CCD
• Assunto(s): Enzimas Expressão heteróloga Serpentes Toxicologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: enzima | expressão heteróloga | PEGlaçao | serpente | Toxinologia

Resumo

A peçonha da serpente Crotalus durissus collilineatus é composta por diferentes moléculas bioativas, incluindo a Collineina-1. Trata-se de uma serinoprotease com capacidade de interferir nos mecanismos de controle da hemostasia, sendo considerada uma alternativa promissora para o tratamento de distúrbios vasculares e trombóticos. Os processos biofarmacêuticos de expressão heteróloga e PEGlação têm se mostrado boas ferramentas para o avanço do uso clínico desta enzima. Porém, ainda são necessárias mais pesquisas sobre as alterações que essas modificações causam na molécula. Diante disso, este trabalho visa a determinação e comparação da solubilidade e estabilidade biológica de uma serinoprotease recombinante da peçonha de Crotalus durissus collilineatus, denominada rCollineina-1, em sua forma PEGlada e não PEGlada. A expressão heteróloga será feita através do uso da levedura Pichia pastoris, e a purificação da proteína recombinante ocorrerá por cromatografia de afinidade a íons metálicos imobilizados e cromatografia de troca catiônica. O polímero mPEG-maleimide, com massa molecular de 5 kDa, será utilizado na PEGlação, e a análise dareação será efetuada por cromatografia líquida de fase reversa em coluna C4. O ensaio desolubilidade será feito através da metodologia de Sonic Shake e as amostras serão analisadas por CLAE. Por fim, a estabilidade biológica, mediante exposição a soro sanguíneo, meio ácido, básico e oxidante, será analisada por Dynamic Light Scattering, dicroísmo circular e atividade enzimática. Desta forma, espera-se determinar fatores importantes para a caracterização da rCollineina-1 e gerar dados sobre a utilidade da PEGlação em uma SVSP recombinante, cuja aplicabilidade foi pouco explorada até o momento