Modulação da expressão de STI1: Efeitos no status de pluripotência mediados pela via de Wnt

• Processo: 24/07492-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Vigência (Início): 01 de setembro de 2024
• Vigência (Término): 28 de fevereiro de 2027
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
• Pesquisador responsável: Marilene Hohmuth Lopes
• Beneficiário: Samuel Ribeiro Soares
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 18/15557-4 - Proteína prion e seus ligantes: potenciais alvos para terapia baseada em células-tronco de glioblastoma, AP.JP2
• Assunto(s): Células-tronco embrionárias Pluripotência Transdução de sinais Proteínas de choque térmico Proteínas Wnt Biologia celular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: células-tronco embrionárias | pluripotência | sinalização celular | Stip1 | Sti1 | Wnt | Biologia Celular

Resumo

As células-tronco embrionárias de camundongos (CTEm) têm sido objeto de pesquisas biomédicas há muito tempo devido à sua pluripotência, a capacidade de dar origem às três camadas germinativas embrionárias. O status pluripotente é finamente regulado por uma rede complexa de fatores de transcrição, como a tríade central de Oct4, Sox2 e Nanog, bem como por extensas redes secundárias que assumem um papel de apoio de acordo com o metaestado (naïve ou primed) da pluripotência em que a célula se encontra. A pluripotência é ainda influenciada por vários reguladores da homeostase proteica, como as proteínas de choque térmico (HSPs) e seus parceiros. Neste contexto de homeostase proteica, uma co-chaperona de HSP70/90, STI1/Stip1 (stress inducible phophoprotein 1), foi recentemente descrita como um componente essencial do desenvolvimento inicial embrionário, como evidenciado pelo seu fenótipo letal após deleção em embriões de camundongo, que ainda é pouco caracterizado no que diz respeito a seu mecanismo de ação. Nossa análise inicial de sequenciamento de RNA, bem como evidências crescentes de modelos de câncer, apontaram correlações positivas entre Stip1 e componentes-chave da via de sinalização Wnt e da rede de pluripotência. Assim, pretendemos caracterizar as interações moleculares entre a sinalização Stip1 e Wnt em nosso modelo de CTEm, a fim de avaliar mais detalhadamente o papel desta co-chaperona no desenvolvimento inicial de mamíferos. CTEm com expressão diferencial de STI1, serão utilizadas em ensaios de RT-qPCR e Western blotting para caracterizar diferenças de expressão gênica e proteica dos principais componentes canônicos da via de sinalização de WNT, bem como marcadores de pluripotência. Também avaliaremos aspectos fenotípicos como proliferação e sobrevivência celulares e formação de blastóides (estruturas que mimetizam blastocisto) para melhor compreender as alterações provocadas pela modulação de STI1 em estágios precoces do desenvolvimento. Ademais, pretendemos caracterizar interações protéicas entre Stip1 e componentes chave da sinalização de Wnt que possam explicar os dados preliminares levantados, bem como investigar a possibilidade de um papel dessa co-chaperona como fator de transcrição por meio de análises de imunoprecipitação de cromatina. Assim, este estudo visa elucidar aspectos moleculares do papel fundamental de Stip1 na embriogênese pré-implantação.