Estabelecimento de processos de transfecção de mRNA com vistas a estudos mecanísticos e reposição terapêutica de mRNA

• Processo: 24/10625-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2024
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2026
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Acordo de Cooperação: Organização Holandesa para a Pesquisa Científica (NWO)
• Pesquisador responsável: Carlos Frederico Martins Menck
• Beneficiário: Giovana da Silva Leandro
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 19/19435-3 - Papel de danos no DNA e função mitocondrial em envelhecimento vascular, imune e neurológico (DNA MoVINg), AP.TEM
• Assunto(s): Reparo do DNA
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: advanced therapeutics | mRNA transfection | Rare Diseases | Reparo do DNA

Resumo

Com esta bolsa pretendemos desenvolver ferramentas mais práticas e modernas, como vetores não-virais para alteração da expressão gênica utilizando transfecção de mRNAs. Este trabalho terá como objetivos estudos mecanísticos das síndromes relacionadas a deficiências no reparo de DNA (Menck e Munford, 2014) e também para possíveis intervenções terapêuticas. A utilização dessa nova técnica permitirá o uso de estratégias mais avançadas para entender os mecanismos moleculares envolvidos na síndrome de Cockayne (CS) e tricotidistrofia (TTD), e em outras patologias associadas ao reparo do DNA. Importante destacar que dispomos no nosso laboratório atualmente de vários plasmídeos para produção de mRNAs de genes codificadores das proteínas NRF2, KEAP1 (ambos relacionados a estresse oxidativo), ALDH2, ADH5 (ambos relacionados a detoxificação de aldeídos), RNAseHI (resolução de R-loops) e Cas9 (edição genômica). Além disso, pretendemos padronizar o processo de transfecção com moléculas com potencial de complementar a deficiência das células dos pacientes (genes que codificam PolH, XPC, XPD, CSB e IDUA), e buscar alternativas terapêuticas menos invasivas e mais eficientes para o tratamento dessas doenças raras para as quais existem poucas ou nenhuma possibilidade de tratamento. A bolsista se dedicará a desenvolver essas moléculas de mRNA para transfecção, com técnicas que já estão sendo estabelecidas no laboratório, fará sua caracterização e a validação dessas ferramentas, disponibilizando para uso dos outros integrantes do laboratório e auxiliando com inúmeros projetos. Além disso, o bolsista auxiliará um projeto de parceria do Laboratório de Reparo de DNA com um grupo da Universidade do Rio Grande do Sul, aprovado pelo CNPq denominado: Emprego de mRNA em processos de edição genômica e terapia para mucopolissacaridose. Para esse projeto, produziremos os mRNA para IDUA, que serão fundamentais para viabilizar testes de terapia gênica para os portadores de mucopolissacaridose (AU)