Construção de uma fusão histona-gene repórter para o monitoramento da proliferação em Saccharomyces cerevisiae.

• Processo: 24/07852-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2024
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Fellipe da Silveira Bezerra de Mello
• Beneficiário: Osmar Nucessor de Macedo Neto
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Citometria de fluxo Divisão celular Biologia sintética
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Citometria de fluxo | Dendra2 | Divisão Celular | mEos3 | mKikGR | Proteína fluorescente fotoconversível | 2 | Biologia Sintética

Resumo

Técnicas de evolução dirigida, design de proteínas e experimentos de mutagênese são amplamente empregadas em estudos biotecnológicos para a manipulação e geração de bibliotecas de variantes gênicas. No entanto, as atuais ferramentas de screening para análise dos potenciais ganhos de fenótipo com estas bibliotecas ainda apresentam deficiências que inviabilizam análises com elevada taxa de rendimento. Ainda que sistemas high-throughput demonstrem eficiência em escalas de até 103-4 variantes, estes possuem limitações técnicas associadas ao alto custo de equipamentos especializados e pessoal treinado. Neste sentido, este projeto busca desenvolver uma ferramenta de seleção de alto rendimento baseada em um marcador genético de proliferação em Saccharomyces cerevisiae, onde a escolha da variante de interesse está intimamente associada à capacidade reprodutora de uma cepa transformada em meio seletivo. Para tanto, será empregado um gene repórter fluorescente fusionado a histonas H2A (HTA2) - proteína com alta abundância intracelular, alta meia-vida, e com padrão de segregação igualitária entre as células filhas. Assim, uma população de leveduras transformadas com uma biblioteca de variantes poderá ser monitorada quanto à emissão de sua fluorescência, e a força do sinal emitido correlacionado à influência da variante no fenótipo. Desta forma, o throughput de seleção se reduz à escala de uma única célula que, acoplado à citometria de fluxo, permitiria exponenciais taxas de rendimento, facilitando a manipulação e análise de bibliotecas genéticas.