Efeito da exposição contínua ao digluconato de clorexidina competência e transformação genética de Streptococcus mutans

• Processo: 24/14419-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2024
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2025
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia
• Pesquisador responsável: Antônio Pedro Ricomini Filho
• Beneficiário: Luiza Bittencourt de Borba
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Piracicaba (FOP). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Piracicaba , SP, Brasil
• Assunto(s): Clorexidina Microbiologia Streptococcus mutans Transformação bacteriana Microbiologia oral
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: clorexidina | Competência Bacteriana | Microbiologia | Streptococcus mutans | Transformação Bacteriana | Microbiologia oral

Resumo

Streptococcus mutans é um microrganismo naturalmente competente, o que significa que possui a capacidade de capturar e incorporar DNA extracelular em seu genoma, uma habilidade denominada transformação bacteriana. A competência é modulada pela expressão do gene do fator sigma (sigX), que é ativado por peptídeos como o CSP (peptídeo estimulador de competência) e o XIP (peptídeo indutor de sigX). Concentrações sub-inibitórias de antimicrobianos são fatores de estresse que modulam essas vias, aumentando ou diminuindo a capacidade de competência. O objetivo deste estudo será avaliar o efeito da exposição contínua a digluconato de clorexidina (CHX) por 1, 7 e 14 dias na ativação de competência e transformação genética de cepas de S. mutans. Serão utilizados mutantes isogênicos de S. mutans contendo repórter de luciferase no promotor dos genes cipB (ativação por CSP) e sigX (ativação por XIP). As culturas serão avaliadas após 1, 7 e 14 dias de exposição contínua à CHX. Culturas serão preparadas e congeladas em densidade óptica (OD600) 0,5. As culturas serão diluídas (1:10) e distribuídas em placas de 96 poços, seguidas da adição de 1 mM de D-luciferina, 250 nM de CSP ou 1¿M de XIP, e concentrações crescentes de CHX (0, 0,25, 0,50, 1,0 µg de CHX/mL). As placas serão incubadas a 37ºC por 12 h em um leitor de microplacas de multidetecção, durante o qual o crescimento (OD600) e a expressão de cipB ou sigX (luminescência) serão mensurados a cada 30 min. Os dados de luminescência serão normalizados pelos valores de OD600 e a área sob a curva (AUC) calculada. O teste de transformação bacteriana será realizado usando o amplicon de resistência à canamicina (aRJ02) que será adicionado após 150, 270 e 390 min de crescimento. Após incubação por 1 h, as suspensões serão plaqueadas em meio ágar não seletivo (TSB) e seletivo (TSB + canamicina). Os dados serão analisados por One-way ANOVA e Teste de Tukey (¿=5%).