Vesículas extracelulares derivadas de células-tronco mesenquimais em modelo ex vivo de cicatrização de feridas de pele

• Processo: 24/06691-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Pesquisa
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2024
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica
• Pesquisador responsável: Viviane Abreu Nunes Cerqueira Dantas
• Beneficiário: Viviane Abreu Nunes Cerqueira Dantas
• Pesquisador Anfitrião: Marjana Tomic-Canic
• Instituição Sede: Escola de Artes, Ciências e Humanidades (EACH). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: University of Miami, Estados Unidos
• Assunto(s): Células-tronco mesenquimais Cicatrização MicroRNAs Pele Vesículas extracelulares Biologia celular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: células-tronco mesenquimais | cicatrização | miRNA | pele | Pele ex vivo | vesículas extracelulares | Biologia celular

Resumo

A cicatrização de feridas é um processo que garante a integridade da pele bem como a reparação eficiente da barreira. A terapia celular e a engenharia de tecidos têm sido apontadas como importantes estratégias no tratamento de feridas e na geração de substitutos e adjuvantes cutâneos que possam acelerar o reparo e regeneração epidérmica. Além disso, foi demonstrado que as células tronco podem regenerar o tecido danificado da pele por meio das suas funções parácrinas. Especificamente, foi demonstrado que as vesículas extracelulares (VE) de células-tronco mesenquimais (CTM) estimulam o processo de cicatrização de feridas por meio da transferência vertical de microRNAs (miRs). Diferentes modelos têm sido propostos para estudar a cicatrização de feridas, porém, requisitos essenciais são atendidos pelo modelo de pele humana ex vivo, que também fornece ferramentas importantes para a compreensão dos mecanismos envolvidos nas doenças cutâneas e nos efeitos da terapias aplicadas topicamente. Uma vez que as características moleculares do miR indicam sua potencial aplicação como marcadores diagnósticos e prognósticos para distúrbios de cicatrização de feridas, propomos aqui o uso de modelo de pele ex vivo para estudar a expressão diferencial de RNA, na presença ou ausência de VE derivadas de CTM, com perspectivas para melhorar resultados, maximizar tratamentos e reduzir riscos associados a patologias e lesões cutâneas. A pele humana será obtida de pacientes submetidos à cirurgia plástica. Uma ferida de 3 mm será criada em um punção de pele de 8 mm de espessura total em toda a derme. As CTM serão cultivadas em condições de cultura convencionais. VE de CTM serão extraídas e purificadas por procedimentos padronizados e analisados por Western blot. Os exossomos serão aplicados em cada amostra de pele. As feridas, coletadas em diferentes momentos, serão analisadas histologicamente por hematoxilina-eosina e imunohistoquímica. O sequenciamento será realizado usando RNA total usando-se o kit RiboZero Transcriptome Directional RNAseq. Cada amostra será sequenciada 40 milhões de vezes, demultiplexadas e convertidas em arquivos FastQ. Os arquivos FastQ serão analisados pelo programa NIAMS Biodata Mining and Discovery. ANOVA será realizada para encontrar genes expressos diferencialmente, mapa de calor e gráficos serão criados com Partek Genomic Suites 7.18.0723. A análise de vias será realizada usando o Ingenuity Pathway Analysis (IPA). O conhecimento gerado neste projeto poderá fornecer ferramentas úteis para o estudo da biologia da pele que são essenciais para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas para diferentes doenças e condições.