AVALIAÇÃO DE TÉCNICAS MOLECULARES PARA DISCRIMINAÇÃO DE ESPÉCIES DE Leishmania spp. DA REGIÃO AMAZÔNICA E EXTRA-AMAZÔNICA BRASILEIRA, COM POTENCIAL APLICAÇÃO NA PRÁTICA CLÍNICA

• Processo: 23/16087-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2024
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2026
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina
• Pesquisador responsável: José Angelo Lauletta Lindoso
• Beneficiário: Rayane Miranda Dias
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Leishmaniose cutânea Reação em cadeia da polimerase em tempo real Sequenciamento
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: HRM-Hsp70 | leishmaniose tegumentar | pcr em tempo real | PCR-RFLP-Hsp70 | sequenciamento | Doenças Infecciosas e Parasitárias

Resumo

Introdução: A Leishmania é o protozoário causador da leishmaniose, doença infecciosa não contagiosa que pode ser classificada em visceral ou tegumentar e pode ser transmitida pela picada de insetos flebotomíneos. Vários métodos de diagnóstico da leishmaniose tegumentar americana foram desenvolvidos, porém nenhum dos exames disponíveis atualmente pode ser considerado padrão-ouro. Os testes moleculares são uma alternativa para o diagnóstico da leishmaniose tegumentar, uma vez que possibilitam a detecção do DNA do parasito, e dependendo do teste empregado, é possível identificar diferentes espécies e o gene hsp-70 é um importante alvo para discriminação de espécies de Leishmania, pois apresenta regiões conservadas, com pouca variabilidade entre as diferentes espécies. Objetivo: Avaliar o uso de diferentes técnicas moleculares, na pratica clínica, que possam ser aplicadas no diagnóstico espécie-específico da leishmaniose tegumentar americana. Metodologia: Serão utilizadas amostras de pacientes do Instituto de Infectologia Emílio e do Centro de Controle de Zoonoses de Santarém-PA. As amostras clínicas serão submetidas à extração de DNA, e será realizada reação em cadeia da polimerase tendo como gene alvo Hsp-70 e os produtos serão visualizados em gel de agarose 2%. Os produtos obtidos na PCR-Hsp70 serão submetidos à digestão com enzima de restrição (HAE III) e posterior visualização do produto fragmentado em gel de agarose 2%. Os fragmentos da PCR-Hsp 70 serão também submetidos ao sequenciamento pela técnica de Sanger e será feito alinhamento com sequências depositadas no genBank, utilizando-se o programa BioEdit. Amostras serão ainda submetidas a uma reação de PCR em tempo-real, utilizando-se o gene Hsp70 como alvo e posteriormente será realizada a análise de perfis de dissociação em alta resolução (HRM=High Resolution Melting).