Aplicação do sistema Cre-loxP para geração e manutenção de diferentes linhagens de camundongos transgênicos

• Processo: 24/18223-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2024
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2026
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Niels Olsen Saraiva Câmara
• Beneficiário: Isabella Cristillo de Almeida Fernandes
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 23/07482-2 - Detecção de estressores extra e intracelulares por células renais e imunes: novos insights sobre recepção e transdução de sinais e sua relevância para a compreensão de doenças renais, AP.TEM
• Assunto(s): Animais geneticamente modificados Nefropatias Inflamação Nefrologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Animais transgenicos | doença renal | Inflamação | Nefrologia

Resumo

O sistema Cre-loxP, uma ferramenta metodológica de edição genética, tem sido largamente utilizado para geração de modelos murinos com mutações gênicas integrais ou condicionais (tecidos-específicos). Essa tecnologia é constituída por dois elementos: (1) da enzima Cre ou Cre recombinase, responsável por catalisar a recombinação gênica, que pode ser configurada para ocorrer de três maneiras (deleção, translocação, inversão); e (2) de sequências específicas de fragmentos de DNA denominadas de regiões loxP (locus de x-over, Phage1). Para geração dos camundongos geneticamente modificados, durante o desenvolvimento do embrião a enzima Cre reconhece a sequência de DNA flanqueada por dois sítios loxP e promove a inativação do gene específico seja por deleção, translocação ou inversão. Diante disso, esse plano de trabalho visa o treinamento para produção e manutenção de linhagens de camundongos transgênicos utilizando o sistema Cre-loxP condicional. Esse trabalho envolve ainda a implementação, padronização e aprimoramento de protocolos para extração de DNA, PCR convencional e eletroforese em gel de agarose para triagem e confirmação dos genótipos celulares das linhagens a serem desenvolvidas. Os alvos moleculares propostos inicialmente nesse estudo são Pex16 (proteína da membrana peroxissomal) e HIF-1¿ (fator induzível por hipóxia 1 alfa) e que estão vinculados a dois projetos de pós-doutorado do nosso laboratório. Contudo, outros alvos moleculares podem ser adicionados a depender da necessidade do laboratório e objetivo da pesquisa a ser desenvolvida. Os nocautes condicionais serão gerados pelo cruzamento de camundongos floxed para essas proteínas com camundongos Cre específicos para células glomerulares e tubulares renais. A obtenção desses animais proporcionará uma melhor avaliação dos mecanismos celulares e moleculares relacionados ao gene inativado submetido ao estresse celular utilizando diferentes modelos de doença renal. Além disso, o desenvolvimento desse plano de trabalho possibilitará a obtenção de novas e inovadoras descobertas científicas para a área de nefrologia.