Diferenciação de células Th1 em pacientes com cardiopatia chagásica e forma indeterminada da doença de Chagas: análise fenotípica, de expressão gênica e epigenética utilizando single-nucleus ATAC-seq e RNA-seq.

• Processo: 24/19182-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2025
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2028
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Edecio Cunha Neto
• Beneficiário: Isabela Pazotti Daher
• Instituição Sede: Instituto do Coração Professor Euryclides de Jesus Zerbini (INCOR). Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP (HCFMUSP). Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 22/00758-0 - Mitocôndrias, interferon gama e genética na cardiopatia chagásica crônica: patogenia, alvos terapêuticos e marcadores prognósticos, AP.TEM
• Assunto(s): Doença de Chagas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Acessibilidade à Cromatina | Cardiomiopatia chagásica crônica | Diferenciação de linfócitos Th1 | Doença de Chagas | single-cell ATAC-seq | Single-Cell RNASeq | Doença de Chagas

Resumo

Estima-se que 6 a 7 milhões de pessoas estejam infectadas com o Trypanosoma cruzi no mundo. A doença de Chagas, causada por esse parasita, é endêmica na América Latina, onde é uma das principais causas de hospitalização por insuficiência cardíaca. Cerca de 30% dos infectados progridem na fase crônica da infecção para a cardiopatia chagásica crônica (CCC), que é caracterizada por uma miocardite destrutiva persistente. A inflamação observada na CCC é caracterizada pela presença de linfócitos T helper 1 (Th1) infiltradas no coração, assim como a presença de IFN-¿ no tecido cardíaco. A frequência dessas células e a quantidade de IFN-¿ no sangue de pacientes CCC também está aumentada, quando comparado com indivíduos com a forma assintomática indeterminada da doença (FI). Por outro lado, observa-se uma menor frequência de linfócitos Th17 em indivíduos CCC quando comparados a FI. Além disso, pacientes com CCC apresentam uma frequência aumentada de populações de monócitos associados a um ambiente inflamatório, e menor frequência de monócitos CD14+HLA-DR low (células mieloides supressoras, MDSC) do que pacientes na forma indeterminada. Dados prévios sugerem que linfócitos T CD4+ naive são heterogêneos em termos de expressão gênica e que diferenças na acessibilidade da cromatina nuclear possam contribuir para diferenciação preferencial para alguns subtipos celulares. Além disso, a plasticidade dos linfócitos T CD4+ permite que haja transdiferenciação entre subtipos, como a conversão de linfócitos Th17 em Th1 não clássicas. Portanto, levantamos a hipótese de que existe uma diferenciação preferencial de linfócitos Th1 em portadores de CCC, seja devido a diferenças na acessibilidade de cromatina e expressão gênica de linfócitos T CD4+ naive ou pela transdiferenciação de linfócitos Th17 em Th1 não clássicos. Sendo assim, avaliaremos por citometria de fluxo, a diferenciação de linfócitos T CD4+ naive isolados do PBMC de pacientes CCC e FI em células Th1, e também se há evidências de transdiferenciação de linfócitos Th17 em Th1 não clássicas. Pretendemos também avaliar a acessibilidade de cromatina e a expressão gênica do PBMC (incluindo a população linfóide e mielóide) de pacientes CCC e FI, utilizando de forma concomitante single-cell ATAC-seq e single-cell RNAseq nas mesmas células. Acreditamos que essa combinação de estratégias experimentais permitirá uma melhor compreensão dos mecanismos que favorecem a diferenciação de linfócitos Th1 e sua possível relação com a progressão diferencial da doença de Chagas, auxiliando no desenvolvimento de futuras abordagens terapêuticas e diagnósticas.