Análise do impacto da deleção da Nfs e Mtu1 na tiolação de tRNAs em Trypanosoma cruzi

• Processo: 24/22253-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 25 de agosto de 2025
• Data de Término da vigência: 24 de fevereiro de 2026
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Ariel Mariano Silber
• Beneficiário: Marilene Souza Braga
• Supervisor: Zdenek Paris
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Czech Academy of Sciences (CAS), República Tcheca
• Vinculado à bolsa: 23/16035-0 - Caracterização funcional das proteínas NFS, ISD11 e MTU1: participação na biologia mitocondrial em Trypanosoma cruzi., BP.DD
• Assunto(s): Trypanosoma cruzi
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Mtu1 | Nfs | tiolação | tRNAs | Trypanosoma cruzi | Biologia Molecular de Tripanossomatídeos

Resumo

Trypanosoma cruzi, o agente causador da doença de Chagas, afeta cerca de 7 milhões de pessoas no mundo todo. Ele tem características únicas, incluindo uma única mitocôndria e ramificada, onde a estrutura do cinetoplasto abriga o genoma mitocondrial (kDNA). Para a tradução de genes codificados por kDNA, um conjunto completo de RNAs de transferência (tRNAs) deve ser importado do citosol. Esses tRNAs sofrem modificações pós-transcricionais, que atendem a várias funções, como estabilidade e regulação da expressão gênica. Entre as modificações, a tiolação foi encontrada nas posições 33 e 34 dos tRNAs, com a tiolação da uridina na posição 33 (sU33) sendo identificada exclusivamente em tripanossomatídeos. A tiolação do sU33 modula negativamente a edição do tRNATrp na mitocôndria do Trypanosoma brucei, impactando a expressão gênica mitocondrial. O complexo proteico responsável por essa modificação compreende uma cisteína desulfurase (NFS; EC.:2.8.1.7), sua proteína acessória (ISD11) e uma 2-tiouridilase específica de tRNA (MTU1; E.C.:2.8.1.14), usando o aminoácido cisteína como doador de tiol. O genoma do T. cruzi codifica ortólogos putativos dessas proteínas, mas seu papel na biologia mitocondrial desse parasita ainda não foi investigado. Então, visando entender a função das proteínas de interesse na biologia do T. cruzi, linhagens nocaute das sequências codificadoras de NFS, ISD11 e MTU1 foram geradas usando CRISPR-Cas9. Neste projeto, o objetivo principal é avaliar as alterações dos níveis de tiolação nos tRNAs citoplasmáticos e mitocondriais nessas linhagens celulares nocaute produzidas: Nfs-/+ e Mtu1-/- e seus respectivos addbacks, nas diferentes formas de vida do T. cruzi. Este estudo pode prover mais informações sobre o papel do NFS e MTU1 na biologia do T. cruzi, principalmente preenchendo a lacuna do estudo da via de tiolação do tRNA neste parasita.Palavras-chave: Trypanosoma cruzi, tRNAs, tiolação, cisteína, CRISPR-Cas9.