Desenvolvimento de nanopartículas lipídicas sólidas para liberação de RNAs de interferência para diferentes alvos da psoríase: estudos físico-químicos, in vitro e in vivo.

• Processo: 25/17775-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2026
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2028
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Farmácia - Farmacotecnia
• Pesquisador responsável: Maria Vitória Lopes Badra Bentley
• Beneficiário: Ualisson José da Silva
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 14/50928-2 - INCT 2014: Nanotecnologia Farmacêutica: uma abordagem transdisciplinar, AP.TEM
• Assunto(s): MicroRNAs Nanopartículas lipídicas sólidas Nanotecnologia farmacêutica Psoríase RNA interferente pequeno
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: miRNA | Nanopartículas Lipídicas Sólidas | Nanotecnologia Farmacêutica | Psoríase | siRNA | Terapia gênica de interferência | Nanotecnologia Farmacêutica

Resumo

A psoríase é uma doença inflamatória crônica, imunomediada, que pode afetar a pele, unhas, mucosas e articulações, além de estar associada à inflamação sistêmica. A psoríase envolve uma resposta imune exacerbada com superexpressão de citocinas como TNF-¿, IL-17A, IL-1¿, IL-6. Nesse cenário, a terapia gênica de interferência surge como uma alternativa promissora ao permitir o silenciamento específico de genes relacionados à inflamação, por meio de siRNAs ou anti-miRNAs. Essa abordagem pode modular vias imunológicas centrais, oferecendo maior eficácia terapêutica e menos efeitos adversos que os tratamentos convencionais. Neste contexto, o presente projeto propõe a utilização da terapia antisense, baseada em small interfering RNA (siRNA) e anti-microRNA (anti-miR), como uma abordagem terapêutica inovadora frente às limitações dos tratamentos tradicionais para a psoríase. Essa estratégia visa a silenciar alvos imunológicos específicos envolvidos na patogênese da doença, como miR-31, NF-¿¿, TNF-¿ e IL-17A, contribuindo para uma resposta terapêutica mais eficaz e duradoura. Devido à baixa biodisponibilidade intracelular dos siRNAs e anti-miR, propõe-se a obtenção e caracterização físico-química de nanopartículas lipídicas sólidas (NLS) catiônicas que complexem siRNA e anti-miR e os liberem nas camadas da pele. As NLS serão produzidas pela técnica de focalização de fluxo hidrodinâmico (MHF, do inglês Microfluidic Hydrodynamic Fosucing) e suas características coloidais serão determinadas por técnicas físico-químicas, como espalhamento de luz dinâmico e eletroforético, bem como será avaliada a capacidade das NLSs em complexar com siRNA e anti-miR e a penetração cutânea em membrana biológica utilizando célula de difusão de Franz. Estudos celulares serão realizados utilizando as linhagens de queratinócitos HaCaT e macrófagos THP-1 e co-cultura de queratinócitos HaCaT e macrófagos Raw 264.7 para investigar viabilidade celular, internalização celular das NLS complexadas com siRNA-FAM ou anti-miR-FAM. A eficácia terapêutica do silenciamento gênico será realizada em queratinócitos HaCaT, macrófagos Raw 264.7 e co-cultura de queratinócitos HaCaT e macrófagos Raw 264.7 estimulados com imiquimode (IMQ) e posteriormente tratados com NLS carregadas com anti-miR-31 ou siRNA NF-¿B ou siRNA IL-17A ou siRNA TNF-¿. As quantificações de citocinas pró-inflamatórias (TNF-¿, IL-17A, IL-23 e IL-6), do NF-¿¿ e do miR-31 serão realizadas por ELISA e real-time PCR. A regulação negativa da psoríase em um sistema mimético da pele humana será avaliada em em modelo in vitro de pele 3D imunocompetente (queratinócitos, macrófagos, fibroblastos, adipócitos) com processo psoriático induzido com IMQ e posterior administração tópica e intradérmica de NLSs carregadas com os RNAi propostos no projeto. As formulações mais promissoras serão testadas in vivo, utilizando um modelo animal de psoríase induzido com IMQ e a eficácia terapêutica do tratamento proposto será avaliada quanto aos parâmetros: índice de gravidade, níveis teciduais de citocinas pró-inflamatórias (TNF-¿, IL-17A, IL-23 e IL-6) e expressão tecidual dos marcadores miR-31, NF-¿¿ por ELISA e real-time PCR. O desenvolvimento tecnológico das NLS para aplicação tópica e estudos funcionais do silenciamento de cada alvo sugeridos neste projeto resultará em um estudo de viabilidade tecnológica e terapêutica de sistemas multifuncionais de administração tópica visando à terapia gênica antisense da psoríase. (AU)