Caracterização do papel de Utp25 na formação do processomo da subunidade pequena (processome SSU) de Saccharomyces cerevisiae

• Processo: 25/28374-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2026
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2028
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Carla Columbano de Oliveira
• Beneficiário: Lucas Farias da Silva
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 20/00901-1 - Controle pós-transcricional de expressão gênica: processamento de pré-rRNA, degradação de mRNA, splicing e montagem de snoRNPs em Saccharomyces cerevisiae, AP.TEM
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Depleção de Pih1 | Processoma | ribossomo | Ssu | Controle pós-transcricional de expressão gênica

Resumo

Os ribossomos são máquinas moleculares formadas por algumas moléculas de rRNA e proteínas, com a principal função de atuar na síntese proteica. Em eucariotos, o ribossomo 80S é formado pelas subunidades 60S (LSU) e 40S (SSU), com vias de processamento distintas. O complexo pré-ribossomal 90S (ou processoma do SSU) é formado por snoRNA U3 e vários fatores proteicos, com papel importante na maturação do precursor da subunidade 40S. A proteína Utp25 foi inicialmente identificada como uma proteína localizada no nucléolo, e faz parte do complexo 90S, no entanto seu papel na formação do complexo pré-ribossomal 90S ainda permanece desconhecida. A dificuldade de caracterização funcional dessa proteína deve-se a sua associação transitória ao pré-ribossomo, o que dificulta seu estudo. No entanto, trabalhos anteriores mostraram que a depleção de proteínas chaves do complexo 90S, como Pih1, permitem o estudo de alguns fatores transientes, como Utp25. Desse modo, a proposta deste estudo é realizar a caracterização funcional de Utp25 na levedura Saccharomyces cerevisiae utilizando mutantes de deleção de Pih1 (¿ pih1) a fim de diminuir a eficiência do processamento de pré-rRNA e, desta maneira, obter informações acerca da função de Utp25 e sua participação da montagem do precursor 90S. Para tanto, o complexo 90S será purificado através da expressão de cepas contendo os fatores do 90S Utp10 e Krr1 fusionados respectivamente às tags TAP e Twin Strep II na cepa ¿ pih1/GAL::UTP25, na qual a expressão de Utp25 é condicional. As proteínas componentes das pré-ribossomais isoladas serão identificados por espectrometria de massas e os pré-rRNAs, por Northern blot. (AU)