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Identificação e caracterização funcional da sumoilação da proteína humana reguladora Ki-1/57

Processo: 09/15216-3
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de janeiro de 2010
Vigência (Término): 31 de dezembro de 2010
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Jörg Kobarg
Beneficiário:Angela Saito
Instituição-sede: Laboratório Nacional de Luz Síncrotron (LNLS). Centro Nacional de Pesquisa em Energia e Materiais (CNPEM). Ministério da Ciência, Tecnologia, Inovações e Comunicações (Brasil). Campinas , SP, Brasil
Assunto(s):Transdução de sinais   Sinalização

Resumo

O antígeno protéico Ki-1/57 foi identificado por um anticorpo monoclonal, Ki-1, que detectou especificamente células malignas de Hodgkin e células Sternberg-Reed no linfoma de Hodgkin. Esta proteína é expressa em células de uma variedade de tipos de câncer, sendo também expressa em leucócitos do sangue humano ativados com mitógenos, mas não em células não ativadas. O antígeno Ki-1/57 mostrou-se fosforilado em resíduos de serina e treonina. Análises de microscopia eletrônica demonstraram que o antígeno Ki-1/57 está localizado no citoplasma, poros nucleares e no núcleo, associado ao nucléolo. Para entender melhor o contexto biológico desta proteína, realizamos análises com o sistema de duplo híbrido de levedura para identificar proteínas que interagem com Ki-1/57. Duas delas são a proteína adaptadora de quinase RACK-1 envolvida em mecanismos da tradução de sinal e a proteína p53 que está relacionada com o mecanismo de verificação de mutações na sequência de DNA das células. Em ensaios celulares vimos ainda que Ki-1/57 está associada a corpúsculos nucleares envolvidos no processamento de RNA e que sua sequência de aminoácidos apresenta motivos de sumoilação. Esta modificação de proteínas com a proteína SUMO (small ubiquitin like modifier) tem sido implicada na regulação da localização sub-celular da proteína e na repressão da expressão gênica. Além disso, a sumoilação ocorre com certa freqüência em proteínas nucleares, principalmente naquelas que se localizam nos corpúsculos nucleares. Neste projeto temos como principal objetivo o estudo funcional da sumoilação da proteína Ki-1/57. Para isso realizaremos mutagêneses sítio dirigido das Lisinas alvos de sumilação na proteína Ki-1/57. Posteriormente as proteínas mutadas serão expressas em células humanas para estudos funcionias e de localização celular. Queremos estudar o efeito da sumoilação na localização celular e na ativação da transcrição gênica utilizando um sistema de gene repórter da luciferase.