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Expressão heteróloga e purificação de fatores transcricionais e proteínas transcricionalmente reguladas pela concentração extracelular de oxigênio para determinação de estrutura..

Processo: 03/13517-0
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de abril de 2004
Vigência (Término): 30 de junho de 2005
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Hamza Fahmi Ali El-Dorry
Beneficiário:Cesar Moises Camilo
Instituição-sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:03/00042-3 - Análise da rede metabólica produtora de energia em microorganismos eucarióticos, AP.TEM
Assunto(s):Expressão de proteínas   Purificação de proteínas   Trichoderma reesei   Escherichia coli   Cromatografia líquida

Resumo

A montagem de complexos de pré-iniciação específicos em promotores, em que são fundamentais as interações proteína-proteína e proteína-DNA, é um passo determinante na regulação transcricional da expressão em eucariotos. Embora uma quantidade considerável de informações a respeito dessas interações esteja disponível, o conhecimento das estruturas tridimensionais dos complexos regulatórios de expressão gênica em eucariotos é restrito. Nesse projeto pretendemos expressar e purificar o fator geral de transcrição TBP ("TATA-box binding protein"), o coativador MBF1 ("Multiprotein bridging factor 1") e o fator de transcrição BTF3 ("RNAPolymerase B transcription factor 3") do fungo filamentoso Trichoderma reesei para posteriores estudos estruturais dos complexos formados por essas proteínas e suas interações com outras proteínas e o DNA. O coativador MBF1 está envolvido no metabolismo de aminoácidos em Saccharomyces cerevisiae, sendo um efetor positivo da transcrição do gene his3, cujo produto é parte da via de síntese de novo de histidina. Durante a investigação em escala genômica da regulação da expressão gênica de T. reesei pela disponibilidade de oxigênio (Bonnacorsi et al., em preparação), observou-se que tanto o coativador MBF1 como o fator de transcrição BTF3 tem sua expressão modulada por hipóxia. (AU)