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Desenvolvimento de método para quantificação de adutos dna-tetrahidrofurano em amostras biológicas

Processo: 07/50924-3
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de junho de 2007
Vigência (Término): 31 de maio de 2008
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica
Pesquisador responsável:Ana Paula de Melo Loureiro
Beneficiário:Mariana Silveira Pedrosa
Instituição-sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Espectrometria de massas   Genotoxicidade

Resumo

Temos estudado alguns mecanismos pelos quais o tetrahidrofurano (THF), um solvente muito utilizado industrialmente, exerce seus efeitos genotóxicos. Apesar de carcinogênico em animais experimentais, há poucos dados sobre sua toxicidade celular, danos a biomoléculas e genotoxicidade. Em trabalho anterior mostramos que adultos de DNA são formados a partir da reação de THF oxidado com 2'-desoxiguanosina, 2-desoxiadenosina e 2'-desoxicitidina, Esses adultos foram caracterizados e diferentes condições de HPLC/ESI/MS-MS foram otimizadas para sua detecção em DNA. Apesar de detectadas, a quantificação das lesões não foi possível, uma vez que não possuímos os coeficientes de extinção molar dos adultos e os padrões isotópicos para serem utilizados como padrões internos na quantificação por ESI/MS. Nesta etapa do trabalho faremos a validação das condições de análise por HPLC/ESI/MS-MS para quantificação dos adultos. Padrões isotópicos (15N5) dos adultos serão sintetizados, purificados por HPLC e caracterizados por espectrometria de massas. Análises de 1H RMN serão feitas para determinação das concentrações dos adultos em soluções cujas absorbâncias serão obtidas. Os coeficientes de extinção molar serão calculados pelas razões entre os valores de absorbância e concentração molar. A validação desses métodos nos permitirá grande especificidade para investigarmos a formação de adultos DNA-THF em células em cultura incubadas com esse solvente. (AU)