Estudo da via de sinalização do NF-kB e da endostatina na célula mesangial em modelos de insuficiência renal aguda endotóxica na presença de Diabetes Mellitus

• Processo: 08/06219-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2009
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2010
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina
• Pesquisador responsável: Nestor Schor
• Beneficiário: Nayda Parisio de Abreu
• Instituição Sede: Departamento de Medicina. Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 04/08311-6 - Mecanismos moleculares, celulares e fisiopatologicos da insuficiencia renal aguda., AP.TEM
• Assunto(s): Nefrologia Lipopolissacarídeos Lesão renal aguda Endostatinas NF-kappa B
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Célula mesangial humana imortalizada | Endostatina | Injúria renal aguda | Lps | Meio hiperglicêmico | NF-kB | Nefrologia

Resumo

A insuficiência renal aguda (IRA) está freqüentemente associada com falência múltipla de órgãos e sepse, e sua presença é um marcador para o aumento da mortalidade, alcançando níveis de 70 a 90%. Os mecanismos subjacentes a IRA são complexos e por isso têm sido alvo de vários estudos, entretanto sua fisiopatologia continua indefinida.A sepse é caracterizada por uma resposta inflamatória generalizada bem como ativação das cascatas fibrinolíticas e de coagulação, resultando em injúria endotelial. Várias substâncias são liberadas na circulação sistêmica como conseqüência a endotoxemia. As citocinas aumentam a síntese de óxido nítrico, reduzindo a resistência vascular, e como resposta compensatória há um aumento na circulação de hormônios vasopressores, incluindo a angiotensina II.O Akt, também conhecido como PKB, é uma serina/treonina quinase que é ativada quando as células são estimuladas por diversos fatores de crescimento. A via de sinalização PI3Akt regula funções celulares normais e fundamentais como: crescimento celular, proliferação e sobrevivência celular. A regulação inapropriada desta via tem sido associada com o desenvolvimento de doenças como diabetes e câncer. Apesar de ter importante participação na fisiologia normal, a regulação inapropriada do NF-kB está relacionada com a patogênese da doença cardiovascular, diabetes tipo 2, inflamação crônica e câncer. Contudo, pouco se sabe sobre sua participação na insuficiência renal aguda.A endostatina foi caracterizada por possuir propriedades antiangiogênicas e por apresentar-se como um inibidor específico da proliferação de células endoteliais. Entretanto, pouco se sabe sobre sua ação, expressão e função durante situações de choque endotóxico por sepse. Mais ainda, estas alterações são agravadas na presença do Diabetes Mellitus não só pelas complicações pré-existentes mas também pelas respostas alteradas dos mecanismos fisiopatológicos envolvidos na IRA.Portanto, o objetivo deste trabalho será avaliar a expressão do NF-kB, do Akt e da endostatina nos modelos de IRA endotóxica e diabetes. Para isso, será utilizada cultura de célula mesangial humana imortalizada (CMHI) em modelo de IRA endotóxica (LPS), Diabetes (meio hiperglicêmico) e na sobreposição destas injurias. Para avaliação da expressão da endostatina e do NF-kB nestes modelos, serão utilizadas as técnicas de real-time-PCR e imunocitoquímica. Para estudo da angiotensina II será realizado teste Imunoenzimático (ELISA) e para análise da proteína do Akt será realizada a técnica de Western blot. Também serão avaliados cálcio intracelular (espectrofluorimetria), proliferação, apoptose e necrose celular (citometria de fluxo).