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Analise da expressao genica no ovario, hipofise e hipotalamo durante o estabelecimento da puberdade em ratas pelo uso da tecnica de dna arrays.

Processo: 01/09368-3
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de outubro de 2001
Vigência (Término): 31 de março de 2003
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
Pesquisador responsável:José Fernando Garcia
Beneficiário:Tatiana Issa Uherara
Instituição-sede: Faculdade de Odontologia (FOA). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araçatuba. Araçatuba , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:97/13372-9 - Identificação de polimorfismo de DNA em genes relacionados com o desenvolvimento corporal e precocidade sexual em bovinos, AP.JP
Assunto(s):Hipotálamo   Ratos   Ovário   Hipófise   Expressão gênica

Resumo

Serão utilizadas 30 ratas, com 15, 30 e 40 dias de idade (10 de cada idade), procedentes do biotério da UNESP Faculdade de Odontologia de Araçatuba- SP. O projeto tem como objetivo analisar por meio da técnica de "DNA arrays", a expressão gênica diferencial do ovário, hipófise e hipotálamo de ratas durante o estabelecimento da puberdade. Para tanto, as ratas serão separadas em três grupos, conforme a idade (grupo de ratas com 15 dias, 30 dias e 40 dias) com 10 ratas em cada grupo. Os animais serão sacrificados e o cérebro será removido com o objetivo de se coletar o hipotálamo e a hipófise e as gônadas serão coletadas da cavidade abdominal. Esses materiais serão imediatamente congelados em nitrogênio líquido (-196 C até o momento da extração de RNA total). Será feito o isolamento de RNA total dos tecidos coletados pelo método do Trizol (GIBCO BRL) e após isso será feita a síntese do DNA complementar (cDNA) através da reação de transcriptase reversa utilizando-se o sistemaSuper Script Tm II Rnase H- reverse transcriptase (GIBCOBRL) com a utilização do oligo dT. Os Cdnas dos diferentes materiais biológicos serão marcados radioativamente pela incorporação de Datp-p33 durante sua síntese. Será feita a hibridação dos cDNAs com membrana contendo 5000 genes expressos no ovário humano e com membranas com 10000 genes, de ratos já descritos e com função conhecida para os cDNAs de hipófise e hipotálamo. (AU)