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Produção de embriões bovinos transgênicos para o Fator IX de coagulação

Processo: 08/00102-0
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de julho de 2008
Vigência (Término): 30 de junho de 2010
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
Pesquisador responsável:Flávio Vieira Meirelles
Beneficiário:Paulo Sérgio Monzani
Instituição-sede: Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga , SP, Brasil
Assunto(s):Clonagem   Hemofilia

Resumo

Os fatores de coagulação sanguínea são necessários para manutenção da homeostase e a deficiência em qualquer fator conduz a desordem de sangramento. A deficiência dos fatores VIII (FVIII) e IX (FIX) são responsáveis pela hemofilia do tipo A e B, respectivamente, enquanto que a deficiência do fator VII (FVII) conduz a características semelhantes a hemofilia A. Estes tipos de deficiências hereditárias necessitam da administração de tais fatores para contenção dos episódios de sangramento. O uso de doses supra-fisológicas do fator FVII atua no tratamento de episódios de sangramento não controlados em pacientes que apresentam efeitos inibitórios para o FVIII e FIX, além de ser empregado em casos preventivos ou de hemorragia provenientes de traumas, ou ainda, em procedimentos cirúrgicos invasivos. Atualmente, a produção de tais fatores recombinantes, é realizada através de cultura de células, que apresenta alto custo e uma produção limitada para a demanda atual. A alternativa mais viável para suprir a demanda de tais fatores e diminuir o custo dos mesmos, é a obtenção de animais transgênicos capazes de produzirem estas proteínas no leite. O presente projeto propõe a obtenção de fragmentos de DNA, referentes à região promotora e dos elementos regulatórios distais do gene da b-caseína bovina. Clonar estes promotores no vetor pEGFP-N1 e avaliar a capacidade de expressão dos mesmos pela produção da proteína verde fluorescente (GFP), em células epiteliais de glândula mamária. Introduzir o promotor com melhor capacidade de expressão, no vetor pLXIN-FIX cedido pelo grupo de pesquisa do Hemocentro (USP - Ribeirão Preto), o qual já expressa o FIX. Transfectar células epiteliais de glândula mamária com o vetor de expressão construído e avaliar a expressão do FIX. Realizar a transferência nuclear de células de glândula mamária transgênicas em oócitos enucleados, e finalmente obter blastocistos transgênicos para o FIX.

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
MONZANI, PAULO S.; ADONA, PAULO R.; OHASHI, OTAVIO M.; MEIRELLES, FLAVIO V.; WHEELER, MATTHEW B. Transgenic bovine as bioreactors: Challenges and perspectives. BIOENGINEERED, v. 7, n. 3, p. 123-131, 2016. Citações Web of Science: 6.
BRESSAN, FABIANA F.; SANGALLI, JULIANO R.; PESSA, LAIS V. F.; PIRES, PEDRO R. L.; MEIRELLES, FLAVIO V. Insights on bovine genetic engineering and cloning. Pesquisa Veterinária Brasileira, v. 33, n. 1, p. 113-118, DEC 2013. Citações Web of Science: 1.

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