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Análise estrutural e bioquímica da septina 7 humana

Processo: 07/53412-3
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de agosto de 2007
Vigência (Término): 31 de dezembro de 2010
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Otavio Henrique Thiemann
Beneficiário:Vitor Hugo Balasco Serrão
Instituição-sede: Instituto de Física de São Carlos (IFSC). Universidade de São Paulo (USP). São Carlos , SP, Brasil
Assunto(s):Clonagem   Purificação   Espectroscopia   Cristalografia

Resumo

As septinas estão presentes em fungos e animais e pertencem a uma família de proteínas cujo domínio de ligação à GTP é conservado. Formam complexos homo e heterooligoméricos que podem unir-se em filamentos. Em mamíferos, septinas têm sido associadas a uma variedade de funções celulares tais como citocinese e exocitose e, também, no desenvolvimento de algumas doenças neurodegenerativas e câncer. Estudos filogenéticos moleculares em humanos têm identificado treze septinas que são divididas em quatro subfamílias (grupos I, II, 111 e IV). Este trabalho tem como objetivo clonar, expressar em Escherichia coli em forma solúvel e obter informações estruturais e bioquímicas da proteína humana septina 7 e de seu domínio GTPase. Estudos estruturais serão feitos utilizando técnicas espectroscópicas como dicroísmo circular, fluorescência e saxs. O gene da septina 7 será amplificado a partir de uma biblioteca cDNA de cérebro fetal bovino utilizando oligonucleotídeos sintetizados. Os fragmentos amplificados serão clonados no vetor pGEM-T e sub-clonados nos vetores de expressão pET-TV. Dados anteriores obtidos por nós mostram que a proteína septina 7 GTPase foi expressa em E. coli e purificada em coluna de afinidade e de gel filtração de forma solúvel. Os espectros da septina 7 GTPase obtidos são característicos de moléculas formadas principalmente por estruturas irregulares hélices e uma pequena fração de folhas. Os resultados deste trabalho acrescentarão informações fundamentais para o conhecimento estrutural e bioquímico das septinas humanas. (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
BALASCO SERRAO, VITOR HUGO; ALESSANDRO, FERNANDO; ARMINI CALDAS, VICTOR EMANOEL; MARCAL, RAFAELA LEITE; PEREIRA, HUMBERTO D'MUNIZ; THIEMANN, OTAVIO HENRIQUE; GARRATT, RICHARD CHARLES. Promiscuous interactions of human septins: The GTP binding domain of SEPT7 forms filaments within the crystal. FEBS Letters, v. 585, n. 24, p. 3868-3873, DEC 15 2011. Citações Web of Science: 13.

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