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Caracterização funcional da proteína de divisão ypsb em Bacillus subtilis

Processo: 09/50203-0
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de agosto de 2009
Vigência (Término): 31 de julho de 2010
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
Pesquisador responsável:Frederico José Gueiros Filho
Beneficiário:José Roberto Tavares
Instituição-sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Fosforilação   Bacillus subtilis   Divisão

Resumo

Através de métodos de bioinformática, identificamos durante o doutorado uma nova proteína integrante do divisomo em B. subtilis. Esta proteína, conhecida como YpsB, é paráloga de DivIVA, uma proteína de divisão já bem caracterizada que desempenha papel importante na regulação da posição onde o septo de divisão será formado. YpsB pode estar envolvida na regulação da síntese de peptideoglicano do septo. Mais especificamente, YpsB seria responsável pelo recrutamento de PBP1, uma enzima necessária para a síntese de peptideoglicano, até o divisomo. Um aspecto ainda pouco compreendido de YpsB é como sua atividade é regulada para que PBP1 seja recrutada para o divisomo apenas no momento em que o septo precisa ser formado. Dados recentes sugerem que isto possa envolver a fosforilação de YpsB. Portanto, propomos neste projeto estudar a fosforilação de YpsB e como isto pode afetar o seu funcionamento. Para isto, construiremos mutantes de YpsB em que resíduos alvo de fosforilação serão alterados para criar proteínas não-fosforiláveis ou constitutivamente fosforiladas. Tentaremos também identificar a quinase responsável pela fosforilação de YpsB a partir de uma abordagem de proteína candidata. Além disso, propomos complementar os estudos funcionais de YpsB com uma análise bioquímica da interação entre YpsB e membranas modelo. Esta análise é motivada por nossa descoberta que YpsB possui uma alfa-hélice antipática em sua região N-terminal de YpsB que possui as características típicas de uma alfa-hélice mediadora de interação periférica com membranas. (AU)