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Clonagem e caracterizacao do gene hmg-d de rhynchosciara americana.

Processo: 04/10352-2
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de novembro de 2004
Vigência (Término): 31 de outubro de 2005
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Fábio Siviero
Beneficiário:Amanda dos Santos Brandão
Instituição-sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Rhynchosciara americana   Amplificação de genes   Cromatina

Resumo

Este projeto visa caracterizar o gene que codifica a putativa proteína HMG-D e estudar suas possíveis funções na organização funcional da cromatina em regiões de amplificação gênica (pufes de DNA) de cromossomos politênicos de Rhynchosciara americana. A proteína candidata foi selecionada em um banco de cDNA seqüenciado recentemente em nosso laboratório. Este banco foi construído a partir de um tecido larval (glândula salivar) no momento em que se inicia o último ciclo de politenia, fase em que ocorre também o fenômeno de amplificação gênica. Com a finalidade de caracterizar o putativo gene HMG-D e seu possível envolvimento com a estrutura dos cromossomos politênicos pretende-se que o aluno isole a região genômica correspondente a partir de um banco genômico construído em bacteriófago (lambda DASH II) utilizando como sondas para a varredura os cDNAs clonados e seqüenciados disponíveis. Após a identificação dos fagos recombinantes suas porções codificantes serão seqüenciadas por "shotgun" e por "primer walking", e seu o padrão de expressão em glândulas salivares ao longo do desenvolvimento será caracterizados através de "Northern Blots". Os dados e clones obtidos pelo aluno auxiliarão na localização cromossômica deste gene através de marcações in situ, bem como para a determinação do perfil de expressão em outros tecidos. (AU)

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