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Producao e purificacao el larga escala de uma beta-glicosidase recombinante para determinacao de estrutura cristalografica

Processo: 09/52021-6
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de agosto de 2009
Vigência (Término): 31 de julho de 2011
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
Pesquisador responsável:Sandro Roberto Marana
Beneficiário:Valquiria Pianheri Souza
Instituição-sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:08/55914-9 - (bioen/pronex FAPESP) Development of beta-glycosidases designed to improve the efficiency of noncomplexed cellulase systems, AP.BIOEN.TEM
Assunto(s):Purificação de proteínas   Enzimas

Resumo

Neste projeto, para estudo da especificidade enzimática, utilizaremos como modelo experimental uma beta-glicosidase digestiva da lagarta Spodoptera frugiperda (Sfbgli). Esta beta-glicosidase tem seu sítio ativo dividido em 4 sub-sítios (-1, +1, +2 e +3). Através de modelos estruturais por homologia, mutagênese sítio-dirigida e experimentos de cinética enzimática são conhecidos os papéis de aminoácidos dos sub-sítios -1 e +1 na determinação de sua especificidade pelo substrato. Contudo, O detalhamento do papel de resíduos do sítio ativo na determinação da especificidade enzimática, bem como da participação de resíduos de outras regiões da enzima no controle desta propriedade depende da resolução da estrutura espacial de Sfbgli. Para preencher esta lacuna, este projeto tem por objetivo o desenvolvimento de um procedimento para purificação de Sfbgli em larga escala (dezenas de miligramas) a partir de culturas da Pichia pastoris que expressam esta beta-glicosidase como proteína recombinante. A obtenção deste material, permitirá a realização de testes de cristalização, o primeiro passo para determinação de estrutura espacial de Sfbgli. (AU)

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