Producao em larga escala de mutantes de uma beta-glicosidase de spodoptera frugiperda.

• Processo: 04/13444-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2005
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2006
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
• Pesquisador responsável: Sandro Roberto Marana
• Beneficiário: Fabio Leekuan Huang Lin
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Proteínas recombinantes Catálise enzimática Enzimas Purificação de proteínas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Beta- Glicosidase | Catalise Enzimatica | Enzimas | Proteinas Recombinantes | Purificacao De Proteinas

Resumo

Propõe-se que a formação de um complexo entre a enzima e o estado de transição do substrato seja o principal fator na determinação desta eficiência catalítica das enzimas. Desta forma, alguns autores sugerem que a formação de interações entre a enzima e o estado fundamental do substrato (complexo ES) não contribuiria para catálise. Por outro lado, outros autores pensam que a energia de interações no complexo ES pode ser utilizada para estabilização do complexo ES‡, sendo desta forma favorável à catálise. A resolução desta controvérsia depende da demonstração experimental de uma correlação entre a energia de interações em ES e ES‡. A beta-glicosidase digestiva (Mr 50.000) é um bom modelo experimental para estes experimentos. Com o uso de mutantes desta enzima, a energia de interações não-covalentes no complexo ES‡ entre diferentes resíduos em uma mesma posição do sítio ativo e o substrato já foram determinadas. Assim, com a obtenção da energia destas mesmas interações no complexo ES para esta mesma série de mutantes seria possível verificar a existência de algum tipo de correlação entre as interações em ES e ES‡. Logo, o objetivo de projeto de IC é a produção e a purificação destes mutantes em larga escala para uma posterior etapa de caracterização. Para tal, dois mutantes desta beta-glicosidase (E451Q e Q39N) serão expressos como proteína recombinante em bactérias ou leveduras e purificados através de cromatografias em sistema FPLC. (AU)