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Purificação de lipases utilizando o sistema de micelas reversas

Processo: 08/51214-2
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de julho de 2008
Vigência (Término): 31 de janeiro de 2010
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
Pesquisador responsável:Valéria Marta Gomes de Lima
Beneficiário:Bruna Torres da Silva
Instituição-sede: Faculdade de Ciências e Letras (FCL-ASSIS). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Assis. Assis , SP, Brasil
Assunto(s):Burkholderia cepacia   Micelas reversas   Lipase

Resumo

Lipases são enzimas que catalisam a hidrólise de ligações éster, em meio aquoso, ou reações sintéticas, quando em ambientes aquo-restritos, o que as tomam interessantes para aplicações em diferentes segmentos industriais. Entretanto, existem alguns fatores limitantes como: instabilidade enzimática, dificuldade de recuperação da enzima após a catálise, e alto custo relacionado à purificação da lipase, realizada principalmente por métodos cromatográficos. Além disso, muitas lipases, devido ao seu forte caráter hidrofóbico, tendem a formar agregados de alta massa molecular, o que dificulta a purificação por métodos tradicionais e obriga à adição de tensoativos ou solventes para rompimento do agregado, elevando os custos. Devido a esses fatores, os sistemas de micelas reversas têm sido estudados tanto para purificação de lipases por extração líquido-líquido, quanto como meio reacional para aplicação dessas enzimas em biocatálise. Micelas reversas consistem de ambientes micro-aquosos, compostos de solvente orgânico, surfactante e água. Este sistema possui uma variedade de vantagens: permite a solubilização tanto de substratos e produtos hidrofílicos quanto hidrofóbicos; evita o contato direto da proteína com o solvente orgânico, possibilita o uso de temperaturas mais elevadas; é uma solução isotópica; é uma técnica com grau de dificuldade menor e com custo reduzido, em relação às técnicas cromatográficas tradicionais. O presente projeto pretende estudar os parâmetros de purificação das lipases produzidas por dois microrganismos, a bactéria Burkholderia cepacia e o fungo filamentoso Trichoderma sp, utilizando o sistema de micelas reversas. Para tanto, após o cultivo dos microrganismos em fermentação submersa, e precipitação da enzima pela adição de sulfato de amônio, serão estudados parâmetros de extração da enzima para o meio micelar, como o efeito do pH e da concentração do surfactante, bem como fatores relacionados à re-extração da enzima, como o efeito da força iônica da solução aquosa extratora e da adição de solventes orgânicos polares. (AU)

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