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Papel da (Na,K)-ATPase na osmorregulação e excreção de amônio em crustáceos eurialinos: identificação e efeitos do FXYD2 na regulação da (Na,K)-ATPase branquial do siri Callinectes danae

Processo: 10/06395-9
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de junho de 2010
Vigência (Término): 30 de novembro de 2011
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
Pesquisador responsável:Francisco de Assis Leone
Beneficiário:Daniela Pereira Garçon
Instituição-sede: Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto (FFCLRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Assunto(s):Osmorregulação   Elementos estruturais de proteínas   Purificação de proteínas

Resumo

Este projeto de Pós-Doutorado é uma continuidade de nossa linha de pesquisa, que vem sendo apoiada pela FAPESP, e cujo objetivo é o estudo sistemático das propriedades estruturais e cinéticas da (Na,K)-ATPase do tecido branquial de diferentes espécies de caranguejos e camarões afim de se tentar estabelecer um modelo para adaptação dos crustáceos a ambientes de diferentes salinidades. A manutenção da osmolalidade da hemolinfa dos crustáceos é atribuída à (Na,K)-ATPase e este mecanismo de adaptação sugere que as respostas dos crustáceos devem envolver uma rápida ativação do transporte de íons que deve ser primária a qualquer outra resposta fisiológica deste animal. No presente projeto pretende-se investigar a sinalização celular vinculada à regulação da (Na,K)-ATPase bem como suas conseqüências diretas na captação de NaCl através das brânquias durante a aclimatação a ambientes hiposalinos e a ambientes marinhos. Para isso serão realizados os seguintes estudos: 1) relacionar o processo de aclimatação do C. danae com a expressão diferencial do FXYD2 (subunidade g); 2) estudar o efeito do FXYD2 fosforilado por PKA na atividade catalítica da (Na,K)-ATPase de C. danae; 3) clonagem e o sequenciamento do FXYD2 presente na preparação da (Na,K)-ATPase branquial de C. danae; 4) estudar o efeito das poliaminas em diferentes meios salinos, relacionando-os as proteínas cinases que são ativadas durante o estresse osmótico, utilizando cultura de células das brânquias de C. danae; 5) elaboração de um protocolo de purificação da (Na,K)-ATPase de C. danae, afim de se obter uma fração enriquecida da enzima visando a identificação de seu padrão de clivagem, e posteriormente a conformação ligada ao sítio de ligação do NH+4; 6) identificar o papel que outros reguladores endógenos (dopamina, octopamina) teriam na (Na,K)-ATPase das células branquiais cultivadas; 7) estabelecer a seqüência de aminoácidos da (Na,K)-ATPase, a fim de identificar os possíveis resíduos envolvidos na ligação dos cátions; 8) relacionar o FXYD2 com as proteínas cinases estimuladas por poliaminas e a sua ação final diante da atividade da (Na,K)-ATPase em diferentes meios salinos, utilizando-se cultura de células das brânquias de C. danae.

Publicações científicas (4)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
LUCENA, MALSON NEILSON; GARCON, DANIELA PEREIRA; LEITE FONTES, CARLOS FREDERICO; MCNAMARA, JOHN CAMPBELL; LEONE, FRANCISCO ASSIS. Polyamines regulate phosphorylation-dephosphorylation kinetics in a crustacean gill (Na+, K+)-ATPase. Molecular and Cellular Biochemistry, v. 429, n. 1-2, p. 187-198, MAY 2017. Citações Web of Science: 4.
LEONE, FRANCISCO A.; GARCON, DANIELA P.; LUCENA, MALSON N.; FALEIROS, ROGERIO O.; AZEVEDO, SERGIO V.; PINTO, MARCELO R.; MCNAMARA, JOHN C. Gill-specific (Na+, K+)-ATPase activity and alpha-subunit mRNA expression during low-salinity acclimation of the ornate blue crab Callinectes ornatus (Decapoda, Brachyura). COMPARATIVE BIOCHEMISTRY AND PHYSIOLOGY B-BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY, v. 186, p. 59-67, AUG 2015. Citações Web of Science: 13.
LEONE, FRANCISCO ASSIS; LUCENA, MALSON NEILSON; REZENDE, LUCIANA AUGUSTO; GARCON, DANIELA PEREIRA; PINTO, MARCELO RODRIGUES; MANTELATTO, FERNANDO LUIS; MCNAMARA, JOHN CAMPBELL. A Kinetic Characterization of (Na+, K+)-ATPase Activity in the Gills of the Pelagic Seabob Shrimp Xiphopenaeus kroyeri (Decapoda, Penaeidae). Journal of Membrane Biology, v. 248, n. 2, p. 257-272, APR 2015. Citações Web of Science: 6.
LUCENA, MALSON N.; PINTO, MARCELO R.; GARCON, DANIELA P.; MCNAMARA, JOHN C.; LEONE, FRANCISCO A. A kinetic characterization of the gill V(H+)-ATPase in juvenile and adult Macrobrachium amazonicum, a diadromous palaemonid shrimp. COMPARATIVE BIOCHEMISTRY AND PHYSIOLOGY B-BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY, v. 181, p. 15-25, MAR 2015. Citações Web of Science: 10.

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