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Efeito da arginina vasopressina sobre o complexo ezrin/radixin/moesin (erm) no controle da atividade do nhe1.

Processo: 09/51391-4
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de julho de 2009
Vigência (Término): 31 de dezembro de 2010
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia de Órgãos e Sistemas
Pesquisador responsável:Maria Oliveira de Souza
Beneficiário:Rafael Kawasaki dos Santos
Instituição-sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Apoptose   Trocadores de sódio-hidrogênio

Resumo

A isoforma 1 do trocador Na+/H+ é uma proteína de membrana, cujo domínio regulatório citoplasmático apresenta grande sensibilidade aos vários sinais extracelulares, tais como fatores de crescimento e vários hormônios. O NHE1 possui sítios de fosforilação que permitem sua interação com diversas proteínas incluindo a proteína kinase C, calcineurina, calmodulina e o complexo proteico Ezrin/radixin/moesin (ERM). Em condições de estresse apoptótico, o complexo ERM pode ser fosforilado pela proteína Rho quinase e nessa condição, ligar-se-á NHE1 formando o complexo NHE1/ERM, que irá recrutar a proteína PI3 Kinase (PI3K), a qual estimula a Akt, que por sua vez, inibe o sistema de caspases. Esta condição, proporciona a resistência da célula para apoptose. Considerando que o hormônio Arginina Vasopressina (AVP) também é um fator anti-apoptótico e dados anteriores do nosso laboratório demonstraram que a AVP modula vias de sinalização celular que regulam a atividade do NHE1, o objetivo deste estudo é investigar se a AVP atua como fator anti-a poptótico por modular a formação do complexo NHE1/ERM/P13 kinase/Akt e consequentemente, inibir as caspases. Com esta finalidade, estamos utilizando células MDCK (linhagem imortalizada, derivada do rim de cão), cujo sinal apoptótico é induzido pela remoção do soro fetal bovino do meio de cultura. As medidas de pHi são realizadas por microscopia de fluorescência, a taxa de sobrevivência celular frente aos diferentes tratamentos será avaliada por colorimetria e a expressão de proteínas será avaliada por western blot. Os experimentos de pHi encontram-se em fase inicial, para efeito de padronização do modelo proposto. (AU)