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Aplicação da técnica de qPCR para o monitoramento de cianobactérias e suas toxinas em reservatórios de água

Processo: 08/53627-2
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de outubro de 2008
Vigência (Término): 30 de setembro de 2011
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Saúde Coletiva - Saúde Pública
Pesquisador responsável:Marli de Fátima Fiore
Beneficiário:Adriana Sturion Lorenzi
Instituição-sede: Centro de Energia Nuclear na Agricultura (CENA). Universidade de São Paulo (USP). Piracicaba , SP, Brasil
Assunto(s):Cianotoxinas

Resumo

Métodos rápidos e sensíveis para a detecção precoce das cianobactérias potencialmente tóxicas, em estações de abastecimento de água e em programas de monitoramento de mananciais, são de fundamental interesse para a prevenção dos efeitos causados na saúde de animais e humanos. Atualmente, a contagem de células, identificação de cianobactérias por microscopia óptica e análises químicas ou imunológicas das toxinas são usadas nos monitoramentos. Em anos recentes, métodos moleculares estão sendo desenvolvidos e propostos para o diagnóstico rápido e sensível da presença de cianobactérias tóxicas em diversos ambientes. Este projeto tem por finalidade implementar uma metodologia capaz de acessar e quantificar as cianobactérias mais freqüentes nos reservatórios de água do Estado de São Paulo, bem como detectar o potencial de produção das toxinas microcistinas e cilindrospermopsinas, usando a técnica de PCR Quantitativo em Tempo Real (qPCR). Serão desenvolvidos oligonucleotídeos LUX, marcados com fluoróforo, flanqueando a região cpcBA-IGS do operon da ficocianina (PC) dos gêneros Anabaena, Aphanizomenon, Cylindrospermopsis, Microcystis e Planktothrix. A PCR duplex envolverá a região PC e o domínio da N-methyltransferase do gene da sintetase de microcistinas (mcyA) dos gêneros Anabaena, Microcystis e Planktothrix. Numa segunda abordagem, o gene mcyA será substituído pelo gene mcyE na PCR duplex, capaz de codificar outra sintetase de microcistinas. Para Aphanizomenon e Cylindrospermopsis, considerando uma terceira abordagem, o gene da amidinotransferase (aoaA) será usado para a detecção de cilindrospermopsinas, juntamente com a respectiva região PC. A padronização da metodologia será feita usando linhagens isoladas, mantidas na coleção de culturas do CENA/USP, e a contagem de suas células será feita pela técnica de Utermöhl. Posteriormente, essa metodologia será aplicada em amostras ambientais de água que serão coletadas em reservatórios do Estado de São Paulo, conhecidos por apresentarem florações tóxicas de cianobactérias. A detecção das cianotoxinas também será feita pelo método ELISA (microcistinas) e Q-TOF (microcistinas a cilindrospermopsinas). (AU)

Publicações científicas (4)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
GENUARIO, DIEGO BONALDO; LORENZI, ADRIANA STURION; AGUJARO, LIVIA FERNANDA; ISAAC, RICARDO DE LIMA; DE PAIVA AZEVEDO, MARIA TERESA; NETO, ROMEU CANTUSIO; FIORE, MARLI FATIMA. Cyanobacterial community and microcystin production in a recreational reservoir with constant Microcystis blooms. Hydrobiologia, v. 779, n. 1, p. 105-125, OCT 2016. Citações Web of Science: 5.
SILVA-STENICO, MARIA ESTELA; RIGONATO, JANAINA; LORENZI, ADRIANA STURION; PAIVA AZEVEDO, MARIA TERESA; SANT'ANNA, CELIA LEITE; FIORE, MARLI FATIMA. Bioactive Cyanopeptides Produced by Sphaerocavum brasiliense Strains (Cyanobacteria). Journal of the Brazilian Chemical Society, v. 26, n. 10, p. 2088-2096, OCT 2015. Citações Web of Science: 2.
SILVA-STENICO, MARIA ESTELA; LORENZI, ADRIANA STURION; TESCHKE, OMAR; PAMPLONA SILVA, CAROLINE SOUZA; ETCHEGARAY, AUGUSTO; FIORE, MARLI FATIMA. Antimicrobial Cyanopeptide Action on Bacterial Cells Observed with Atomic Force Microscopy. CURRENT NANOSCIENCE, v. 9, n. 1, p. 141-148, FEB 2013. Citações Web of Science: 1.
SILVA-STENICO, MARIA ESTELA; PAMPLONA SILVA, CAROLINE SOUZA; LORENZI, ADRIANA STURION; SHISHIDO, TANIA KEIKO; ETCHEGARAY, AUGUSTO; LIRA, SIMONE POSSEDENTE; BERALDO MORAES, LUIZ ALBERTO; FIORE, MARLI FATIMA. Non-ribosomal peptides produced by Brazilian cyanobacterial isolates with antimicrobial activity. MICROBIOLOGICAL RESEARCH, v. 166, n. 3, p. 161-175, 2011. Citações Web of Science: 34.

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