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Purificação, cristalização e caracterização cristalográfica preliminar da enzima diidroorotato desidrogenase de Xylella fastidiosa linhagem temécula

Processo: 07/08638-3
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de abril de 2008
Vigência (Término): 31 de março de 2009
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular
Pesquisador responsável:Maria Cristina Nonato
Beneficiário:Cintia Yumi Nomi
Instituição-sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Assunto(s):Cristalografia de proteínas   Purificação de proteínas   Expressão de proteínas   Elementos estruturais de proteínas   Diidroorotato desidrogenase   Xylella fastidiosa

Resumo

O presente projeto visa a purificação, cristalização e caracterização cristalográfica preliminar da enzima diidrooorotato desidrogenase de Xylella fastidiosa-linhagem temécula. A Xylella fastidiosa é uma bactéria fitopatogênica, gran negativa, que ataca os vasos de xilema de seus hospedeiros, bloqueando o movimento de água e nutrientes. A bactéria Xylella fastidiosa possui diversas linhagens que atingem cultivos específicos, como amora, laranja, uva, café e amêndoa. A linhagem denominada temécula é responsável pela doença de Pierce que ataca plantações de uva na região da Califórnia, forte pólo vinícola dos Estados Unidos. A transmissão da bactéria é feita por um inseto vetor, conhecido como cigarrinha da família Cicadellidae, que se alimenta de ramos e flores preferencialmente nos tecidos do xilema. A enzima diidroorotato desidrogenase (DHODH) pertence à via de síntese de novo de nucleotídeos de pirimidinas, catalisando a oxidação da molécula L-diidroorotato em orotato, através de um mecanismo dependente de FMN (flavina mononucleotídeo) e receptores de elétrons. Nucleotídeos de pirimidina são essenciais para os ácidos nucléicos, metabolismo, em mecanismos de ativação de açúcar, em glicosilação pós-traducional de proteínas e lipídeos e para a biosíntese de fosfolipídeos. Esforços recentes no desenvolvimento de drogas "antipirimidinas" com atividade anti-inflamatória, imunosupressora, antiproliferativa e antiparasitária tem focado a enzima DHODH como alvo promissor na tentativa de reduzir o nível intracelular de nucleotídeos de pirimidina. Dentro deste contexto, a produção heteróloga de XfDHODH e a caracterização cristalográfica preliminar constitui o primeiro passo para a determinação da estrutura da enzima XfDHODH-linhagem temécula poderá nos fornecer valiosas informações para entender o papel biológico dessa enzima e no desenvolvimento de inibidores específicos, como uma importante ferramenta no combate a doença de Pierce.