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Modificacao genica de celulas-tronco mesenquimais humanas com fatores de transcricao responsaveis pela manutencao da pluripotencialidade.

Processo: 07/52633-6
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de agosto de 2007
Vigência (Término): 31 de janeiro de 2011
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
Pesquisador responsável:Dimas Tadeu Covas
Beneficiário:Virginia Picanço e Castro
Instituição-sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Assunto(s):Diferenciação celular   Células-tronco mesenquimais   Fatores de transcrição

Resumo

Alguns fatores de transcrição (FT), tais como, Nanog, Sox-2 e Oct3/4 vêm sendo apontados como fatores essenciais para a manutenção da pluripotencialidade. O objetivo central do projeto visa modificar geneticamente Células Tronco Mesenquimais (CTM) com a transdução lentivíral contendo fatores de transcrição com o intuito de transformar células mesenquimais multipotentes em células mesenquimais pluripotentes. Este projeto envolve as seguintes abordagens: a) transduzir CTM com vetores lentivírais 1054 contendo um dos fatores de transcrição (Nanog, Oct3/4, Sox 2, catenina, Kfl4, c-myc, Esrrb, Tcl 1e Tbx 3) juntamente com o gene GFP para que as células transduzidas possam ser selecionadas por Citometria de Fluxo (GFP positivas); b) Inicialmente, as transduções de CTM serão realizadas com um fator de transcrição de cada vez e posteriormente combinações entre os fatores de transcrição poderão ser feitas; c) avaliar as alterações causadas no perfil de expressão gênica; d) avaliar mudanças na morfologia das células transformadas; e) determinar se as CTM modificadas apresentam marcadores típicos de CTE (como por exemplo: fosfatasse alcalina e antígenos SSEA-1) e por fim avaliar se as células mesenquimais modificadas adquirem a capacidade de se diferenciar em tecidos dos três folhetos germinativos. (AU)