Analise transcricional envolvida na resposta ao ph ambiente durante a interacao do dermatofito trichophyton rubrum com o hospedeiro in vitro

• Processo: 07/56564-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2009
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Nilce Maria Martinez-Rossi
• Beneficiário: Henrique César Santejo Silveira
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 02/08391-4 - Genética molecular e genômica funcional de fungos, AP.TEM
• Assunto(s): Análise de sequência com séries de oligonucleotídeos Trichophyton rubrum Virulência Expressão gênica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cdna Microarrays | Expressao Genica | Monitoramento Do Ph | Pacc | Patogenicidade | Trichophyton Rubrum

Resumo

Os dermatófitos como o Trichophyton rubrum são fungos filamentosos patogênicos que, uma vez estabelecidos em seu hospedeiro, buscam nutrientes para o seu desenvolvimento. A secreção de enzimas, como queratinases, é um fator determinante na invasão e utilização dos tecidos do hospedeiro como fonte de nutrientes e é freqüentemente regulada pelo pH. Conseqüentemente, os mecanismos de instalação e manutenção da infecção no hospedeiro são provavelmente dependentes direta ou indiretamente do monitoramento do pH ambiente. O presente trabalho visa revelar genes de T. rubrum diferencialmente expressos durante o processo de degradação de queratina, mimetizando as condições de infecção. Utilizaremos nestes ensaios uma linhagem selvagem e um mutante com o gene pacC nocauteado. A proteína PacC é um fator de transcrição, de amplo domínio, envolvida no monitoramento do pH ambiente e foi previamente mostrado em nosso laboratório que ela controla a atividade queratinolítica em T. rubrum. Utilizaremos a tecnologia dos cDNA microarrays em membranas que serão constituídas a partir de clones oriundos de diversas bibliotecas de ESTs de T. rubrum existentes em nosso laboratório. Com os dados obtidos será possível estabelecer uma rede de interações gênicas identificando os genes de maior interesse, que serão escolhidos para validação por PCR em Tempo Real ou Northern Blotting. Alguns desses genes serão nocauteados e os mutantes utilizados em ensaios funcionais. Portanto, pretendemos revelar genes envolvidos nos mecanismos de patogenicidade deste dermatófito, que poderão se constituir em potenciais alvos para o desenvolvimento de novas drogas antifúngicas. (AU)