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Análise transcricional envolvida na resposta ao pH ambiente durante a interação do dermatófito Trichophyton rubrum com o hospedeiro in vitro

Processo: 07/56564-9
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de novembro de 2007
Vigência (Término): 31 de outubro de 2009
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
Pesquisador responsável:Nilce Maria Martinez-Rossi
Beneficiário:Henrique César Santejo Silveira
Instituição-sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:02/08391-4 - Genética molecular e genômica funcional de fungos, AP.TEM
Assunto(s):Análise de sequência com séries de oligonucleotídeos   Trichophyton rubrum   Virulência   Expressão gênica

Resumo

Os dermatófitos como o Trichophyton rubrum são fungos filamentosos patogênicos que, uma vez estabelecidos em seu hospedeiro, buscam nutrientes para o seu desenvolvimento. A secreção de enzimas, como queratinases, é um fator determinante na invasão e utilização dos tecidos do hospedeiro como fonte de nutrientes e é freqüentemente regulada pelo pH. Conseqüentemente, os mecanismos de instalação e manutenção da infecção no hospedeiro são provavelmente dependentes direta ou indiretamente do monitoramento do pH ambiente. O presente trabalho visa revelar genes de T. rubrum diferencialmente expressos durante o processo de degradação de queratina, mimetizando as condições de infecção. Utilizaremos nestes ensaios uma linhagem selvagem e um mutante com o gene pacC nocauteado. A proteína PacC é um fator de transcrição, de amplo domínio, envolvida no monitoramento do pH ambiente e foi previamente mostrado em nosso laboratório que ela controla a atividade queratinolítica em T. rubrum. Utilizaremos a tecnologia dos cDNA microarrays em membranas que serão constituídas a partir de clones oriundos de diversas bibliotecas de ESTs de T. rubrum existentes em nosso laboratório. Com os dados obtidos será possível estabelecer uma rede de interações gênicas identificando os genes de maior interesse, que serão escolhidos para validação por PCR em Tempo Real ou Northern Blotting. Alguns desses genes serão nocauteados e os mutantes utilizados em ensaios funcionais. Portanto, pretendemos revelar genes envolvidos nos mecanismos de patogenicidade deste dermatófito, que poderão se constituir em potenciais alvos para o desenvolvimento de novas drogas antifúngicas. (AU)