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Análise funcional da proteína SET na regulação da Akt em linhagem celular humana

Processo: 09/05527-1
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de maio de 2009
Vigência (Término): 31 de março de 2011
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Andréia Machado Leopoldino
Beneficiário:Renata Nishida Goto
Instituição-sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:06/06334-4 - Estudo molecular e funcional da oncoproteína SET, AP.JP
Assunto(s):Fosforilação   Sinalização   Neoplasias

Resumo

A proteína SET possui expressão alterada em tumores de cavidade oral o que sugere seupapel como oncogene nesta tumorigênese. A proposta de iniciação científica está vinculadaao Projeto de Jovem Pesquisador aprovado pela FAPESP (2006/06334-4). Sendo assim oobjetivo deste trabalho de IC é a identificar qual região da proteína SET exerce atividade naregulação da fosforilação da proteína AKT. Para avaliar o papel da SET e mapear a regiãoenvolvida na atividade de AKT será realizada a expressão da proteína e das regiões da SETusando vetor de expressão em eucarioto e a linhagem celular HEK293T humana. Os DNAsrecombinantes já foram obtidos no projeto de IC finalizado em dezembro de 2008(2008/01509-6) e estão disponíveis para o estudo funcional. A análise de expressão da SETe das regiões específicas da SET será avaliada por immunoblotting usando anticorpo anti-SET e anti-V5, e a alteração de fosforilação da proteína AKT será avaliada porimmunoblotting usando anticorpo anti-phospho-AKT e AKT total. Será realizada também aanálise de proliferação celular usando ensaio de MTT e localização celular da proteína edas regiões específicas por imunocitoquímica. Esta proposta permitirá o treinamento doaluno de IC e auxiliará no desenvolvimento do projeto JP. Os resultados obtidos serãoextremamente importantes para a proposta "Estudo molecular e funcional da oncoproteínaSET" (2006/06334-4).