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Microarranjos de DNA na análise da expressão temporal de genes na infecção de célula humana por Trypanosoma Cruzi

Processo: 04/07161-0
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de fevereiro de 2005
Vigência (Término): 29 de fevereiro de 2008
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Bianca Silvana Zingales
Beneficiário:Aurélio Pedroso Júnior
Instituição-sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Doença de Chagas   Análise de sequência com séries de oligonucleotídeos   Etiquetas de sequências expressas   Trypanosoma cruzi   Genômica comparativa

Resumo

Este projeto tem como objetivo geral comparar a evolução temporal da expressão gênica de duas cepas de Trypanosoma cruzi durante a infecção de uma linhagem celular humana, bem como caracterizar a resposta da célula hospedeira à infecção pelas duas cepas. Os objetivos específicos são: (a) comparar a expressão gênica de duas cepas de T. cruzi isoladas, respectivamente, de paciente assintomático e de paciente com cardiopatia chagásica durante a infecção de culturas de fibroblastos humanos. Para esta finalidade serão utilizados microarranjos de T. cruzi já disponíveis e em construção em nosso laboratório no IQUSP; (b) comparar a expressão gênica de fibroblastos humanos ao longo da infecção com as duas cepas de T. cruzi, utilizando microarranjos humanos, a serem disponibilizados pelo Dr. David Munroe (NCI-SAIC, Frederick, EUA), no segundo ano do projeto. As sondas que apresentarem hibridização diferencial serão comprovadas por Northern blot e Real Time PCR. Um estudo-piloto já foi realizado, onde foi analisada a expressão gênica de fibroblastos humanos após 24 horas de infecção com T. cruzi, utilizando microarranjos contendo cerca de 24.000 seqüências humanas. Este estudo mostrou que a abordagem experimental é válida, e que um estudo mais abrangente poderá fornecer dados interessantes que podem contribuir para o entendimento da patogênese das cepas de T. cruzi. (AU)