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Sistemas micelares de duas faces aquosas aplicados a remocao de endotoxina presente em preparacoes contendo biomoleculas.

Processo: 05/58559-7
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de abril de 2006
Vigência (Término): 31 de janeiro de 2007
Área do conhecimento:Engenharias - Engenharia Química - Processos Industriais de Engenharia Química
Pesquisador responsável:Adalberto Pessoa Junior
Beneficiário:Pérola de Oliveira e Magalhães
Instituição-sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Biotecnologia   Purificação   Endotoxinas   Moléculas bioativas   Proteínas

Resumo

Em indústria biotecnológica é comum a utilização de bactérias como hospedeiros para obtenção de proteínas recombinantes de interesse farmacêutico. Desta forma, faz-se necessária a remoção de endotoxinas das preparações resultantes sem que ocorra desnaturação protéica. O presente projeto visa o estudo da utilização de sistemas micelares de duas fases aquosas para remoção de endotoxinas de preparações contendo proteínas. Esse sistema proporciona uma ambiente favorável às biomoléculas e possibilidade de remoção das endotoxinas, que são moléculas lipopolissacarídicas e, portanto, apresentam caráter anfifílico semelhantemente aos tensoativos. Será estudada a partição de endotoxina, obtida de cultivo de cepa recombinante de Escherichia coli DH5-alfa em sistema micelar constituído pelo tensoativo Triton X-114. Será estudada a influência do efeito de volume de exclusão e da formação de domínios de uma fase na outra na partição da endotoxina. Os ensaios serão realizados inicialmente com a endotoxina pura e, em seqüência, na presença da proteína verde fluorescente recombinante (GFPuv), a qual vem sendo estudada como potencial indicador biológico. Para a realização deste estudo, será necessária a implementação de técnicas de quantificação de endotoxinas. Além de ser avaliada a influência da endotoxina na curva binodal do sistema micelar, bem como a influência do tensoativo na metodologia determinação de endotoxina. (AU)