Busca avançada
Ano de início
Entree

Efeito do silenciamento do gene MDM2 nas respostas de células humanas primárias a irradiação UVB

Processo: 07/52949-3
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de agosto de 2007
Vigência (Término): 31 de dezembro de 2008
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Carlos Frederico Martins Menck
Beneficiário:Tomás de Paula e Silva
Instituição-sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:03/13255-5 - Genes de reparo de DNA: análise funcional e evolução, AP.TEM
Assunto(s):Xeroderma pigmentoso   Síndrome de Cockayne   Raios ultravioleta   Interferência de RNA   Fibroblastos   Apoptose   Transfecção

Resumo

O presente projeto destina-se inicialmente à caracterização das respostas à irradiação com luz ultravioleta (UVB) de fibroblastos humanos primários em cultura, provenientes de indivíduos normais e de portadores das síndromes Xeroderma Pigmentosum grupo C (XP-C) e Síndrome de Cockayne grupo B (CS-B), ambas resultantes de mutações em genes ligados ao reparo de DNA por excisão de nucleotídeos (NER), a principal via de remoção dos danos causados por UV. As respostas serão medidas em termos de viabilidade e morte por apoptose das células, utilizando para isso testes de metabolismo e de conteúdo de DNA celular. As respostas de células em confluência (em aquiescência mitótica) e em sub-confluência serão comparadas. Em seguida será otimizado um protocolo para transfecção dessas células com siRNA, com o qual será silenciada a produção da proteína Mdm2 (envolvida na regulação da resposta apoptótica por sua interação com a proteína p53) para a verificação dos efeitos resultantes nas mesmas respostas à irradiação UVB. A comparação com as respostas obtidas em células não tratadas permitirá investigar as funções da Mdm2 na regulação da resposta a danos no DNA. A pesquisa proposta propicia, portanto, o desenvolvimento de protocolos experimentais de utilidade geral e uma melhor caracterização das funções da Mdm2 em importantes processos celulares. (AU)