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Complementação de células humanas deficientes em reparo de DNA pela transferência do gene XPC por meio de adenovírus recombinante

Processo: 99/03419-3
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de agosto de 1999
Vigência (Término): 31 de dezembro de 2000
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
Pesquisador responsável:Carlos Frederico Martins Menck
Beneficiário:Maria Carolina Nasser Marchetto
Instituição-sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:98/11119-7 - Reparo de DNA lesado e conseqüências biológicas, AP.TEM
Assunto(s):Reparo do DNA   Adenovirus

Resumo

O presente projeto objetivo construir e testar vetores recombinantes para expressão do gene XPC, relacionado a reparo de DNA, em células humanas deficientes. Inicialmente, deveremos obter o cassete de expressão contendo o cDNA XPC, que será testado em um vetor derivado de vírus Epstein-Barr. Será construído o vetor sp1A-XPC, que contém parte do genoma do adenovírus, carregando o cDNA XPC sob ação do promotor CMV. Esse Vetor pode formar o adenovírus recombinante-XPC por recombinação em células humanas 293, cotransfectadas com o plasmídeo pJM17 (que possui as seqüências de todos os genes de adenovírus, com exceção do gene El que está interrompido). As células 293 possuem o gene El de adenovírus, que transcomplementa a produção de partículas virais recombinantes. Esses vírus serão empregados na infecção de células humanas XPC, onde devem propiciar uma expressão transiente do gene. Para verificar a complementação da deficiência em reparo, serão realizadas curvas de sobrevivência e experimentos de síntese de reparo. (AU)