Lmasf1: estudo de um gene de regiao telomerica de "leishmania major" com potencial funcao anti-silenciadora.

• Processo: 01/08744-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2001
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2002
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Angela Kaysel Cruz
• Beneficiário: André Luiz Pedrosa
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 99/12403-3 - Do genoma à biologia de Leishmania: uma abordagem compreensiva, AP.TEM
• Assunto(s): Leishmania major Manipulação genética
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Leishmania Major | Manipulacao Genetica | Nocaute Genico | Organizacao Cromossomica | Regiao Telomerica | Silenciamento Transcricional

Resumo

Durante o Doutorado, trabalhamos na caracterização de clones que representam as extremidades de três cromossomos de Leishmania major e o seqüenciamento do cosmídeo que representa uma das extremidades do cromossomo 20 revelou a presença de 10 fases abertas de leitura (ORFs). Uma destas ORFs apresentou homologia com um gene de S. cerevisae, denominado ASF1 (Anti-Silencing Function 1), que está envolvido na desrepressão transcricional das extremidades dos cromossomos de levedura. Neste projeto, propomos avaliar a participação do homólogo do gene ASF1 em Leishmania (LmASFI) nas diferentes formas de diferenciação do parasito. Pretendemos demonstrar a função do gene LmASFI a partir de uma estratégia clássica de determinação de função, baseada no aumento dos níveis de expressão do gene LmASFI e em sua remoção do genoma da Leishmania, por recombinação homóloga. Paralelamente, construiremos um vetor para inserção de uma marca de seleção na região telomérica do cromossomo 20 para avaliar a função anti-silenciadora. Finalmente, com o objetivo de estudar a participação de LmASFI na diferenciação de formas promastigotas em amastigotas, avaliaremos a capacidade do mutante que super-expressa LmASFI e do mutante nulo em produzir lesão em um modelo murino de leishmaniose. (AU)