| Processo: | 06/57573-9 |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Doutorado |
| Data de Início da vigência: | 01 de dezembro de 2006 |
| Data de Término da vigência: | 28 de fevereiro de 2010 |
| Área de conhecimento: | Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular |
| Pesquisador responsável: | Ana Paula Ulian de Araujo |
| Beneficiário: | Joci Neuby Alves Macedo |
| Instituição Sede: | Instituto de Física de São Carlos (IFSC). Universidade de São Paulo (USP). São Carlos , SP, Brasil |
| Vinculado ao auxílio: | 98/14138-2 - Center for Structural Molecular Biotechnology, AP.CEPID |
| Assunto(s): | Septinas Doenças neurodegenerativas |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | Amiloides | Caracterizacao Funcional | Duplo Hibrido | Expressao Heterologa | Fluorescencia | Septina Humanas |
Resumo Septinas pertencem a uma família de proteínas que se liga a GTP e que são formadas basicamente por três regiões: um domínio N-terminal variável e rico em prolina, um domínio central de ligação a GTP e um domínio C-terminal predito coiled-coil. Em humanos foram identificadas 13 septinas humanas que estão sendo relacionadas com diversas funções celulares, com doenças neurodegenerativas (mal de Parkinson e de Alzheimer) e com alguns tipos de câncer. Nesta proposta, objetivamos clonar, expressar e purificar as septinas humanas SEPT3 e SEPT5 inteiras, seus domínios de ligação à GTP e o domínio GTP com C-terminal, para subseqüentes estudos de estabilidade estrutural utilizando cromatografia de exclusão molecular, e técnicas espectroscópicas, como fluorescência e dicroísmo circular. Investigaremos a capacidade de formação de amilóides destas proteínas utilizando marcadores fluorescentes específicos como ThT (Thioflavin T). Estudos de atividade serão realizados a fim de caracterizar o domínio de ligação à GTP. A técnica de duplo híbrido será usada para screen de duas bibliotecas de cDNA (cérebro fetal humano e leucócitos), usando como isca SEPT5 a fim de buscar parceiros protéicos desta proteína, visando contribuir com a caracterização funcional destas moléculas. Como resultados preliminares já temos a clonagem e expressão heteróloga de SEPT3 inteira e suas versões truncadas de forma solúvel, o que nos permitiu purificá-las em condições nativas. Estudos de estabilidade estrutural por dicroísmo circular já estão em andamento. (AU) | |
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