Expressão purificação caracterização e modelagem molecular da enzima glucos-6-fosfato isomerase de Leishmania mexicana com objetivo de determinar a estrutura cristalográfica pela técnica de difração de raios-X

• Processo: 98/15285-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 1999
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2001
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular
• Pesquisador responsável: Otavio Henrique Thiemann
• Beneficiário: Artur Torres Cordeiro
• Instituição Sede: Instituto de Física de São Carlos (IFSC). Universidade de São Paulo (USP). São Carlos , SP, Brasil
• Assunto(s): Biologia molecular Modelagem molecular Cristalografia de proteínas Glicose
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biologia Molecular | Bioquimica De Enzimas | Cristalografia De Proteina | Espectroscopia De Proteina | Glicose | Modelagem Molecular

Resumo

Leishmaniase afeta mais de 12 milhões de pessoas em 88 países, 16 dos quais são países em desenvolvimento. O protozoário Leishmania mexicana é transmitido pela picada da mosca "sandflies" (Phlebotomus spp.). Atualmente drogas são disponíveis, mas com a necessidade de uso de doses altas e com acentuado efeitos colaterais. Com a intenção de obter drogas mais eficientes e específicas, metabolismo chave deste organismo pode ser explorado, como o ciclo da glicólise, do qual estes organismos é altamente dependente, e outros evidenciados recentemente como ciclo da pentose fosfato e gluconeogênesis. Glucose-6-fosfato isomerase (G6P) é uma enzima integrante dos três metabolismos citados, e portanto alvo importante no desenvolvimento de novas drogas. O objetivo principal deste projeto é determinar a estrutura tridimensional da enzima G6P de Leishmania mexicana através da difração de raios-X de monocristais desta enzima. Para tanto plasmídeos específicos para expressão em grande quantidade desta enzima será obtido partindo de plasmídeo cedido pelo colaborador Dr. Paul Michels (Research Unit for Tropical Diseases, Catholic University of Louvain, Bruxelas, Bélgica), com a inserção de sequência N-terminal com repetição do resíduo histidina para facilitar a purificação através de uma única coluna de afinidade. O produto da expressão será caracterizado através de técnicas diversas (eletroforese, cromatografia, ensaios de atividade e espectroscopia) e experimentos de cristalização da enzima recombinante na ausência e presença de inibidores serão conduzidos. Através da modelagem molecular a estruturara da G6P humana e de Leishmania mexicana serão obtidas tendo como modelo inicial a estrutura da G6P de coelho (coordenadas gentilmente cedidas pelo Dr. Christopher Davies, St. Jude Children's Research Hospital, Memphis, TN, Estados Unidos) com o objetivo de evidenciar diferenças estruturais que permitam localizar possíveis sítios alvo para o desenvolvimento racional de novos inibidores seletivos. Na disponibilidade de cristais, determinação da estrutura através do uso da técnica de substituição molecular tendo como modelo inicial a estrutura da G6P de coelho ou dos modelos construídos será obtida. (AU)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

CORDEIRO, Artur Torres. Determinação da estrutura cristalográfica por difração de raios-x da enzima glicose 6-fosfato isomerase humana. 2001. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Física de São Carlos (IFSC/BT) São Carlos.