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Comparação metodológica para rastreamento de mutações nos genes da globina alfa

Processo: 99/11121-4
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Vigência (Início): 01 de agosto de 2000
Vigência (Término): 31 de julho de 2002
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Anatomia Patológica e Patologia Clínica
Pesquisador responsável:Maria de Fatima Sonati
Beneficiário:Simone Bordignon de Jorge
Instituição-sede: Faculdade de Ciências Médicas (FCM). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
Assunto(s):Globinas alfa   Hemoglobinopatias   Análise de sequência de DNA   Mutação

Resumo

Mutações nos genes da globina alfa humana levam à produção de Hbs anômalas e de talassemia alfa. Os métodos mais usados no rastreamento de mutações são o Denaturing Gradient Gel Eletrophoresis (DGGE), o Single-Strand Conformation Polymorphism (SSCP) e a Análise de Heteroduplexes (AH), alternativamente ao sequenciamento completo dos genes. Em função da elevada composição de G-C dos genes alfa, a eficiência destes métodos, neste caso, acaba sendo reduzida, tornando necessário, na maioria das vezes, o seqüenciamento total dos 6 exons (3 exons/gene, 2 genes). Alguns autores têm tentado adaptar as técnicas de rastreamento às características destes genes, para permitir uma maior desnaturação, amplificação e seleção de fragmentos mutantes. O objetivo do presente trabalho é comparar o SSCP e a AH com o seqüenciamento gênico na detecção de mutações nos genes alfa. O SSCP será testado em 2 sistemas (Phast System e Gene-Phor, ambos da Pharmacia, com coloração pela prata), e em 2 condições diferentes (Ayala, 1996 e Harteveld, 1997). A AH será realizada através da técnica de Conformation Sensitive Gel Electrophoresis (CSGE), com gel comum e MDE. O seqüenciamento será realizado em "linha reta", empregando 3 das 4 bases do DNA. Diferentes mutações, previamente identificadas, serão testadas em cada método. (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
S.B. JORGE; M.B. MELO; F.F. COSTA; M.F. SONATI. Screening for mutations in human alpha-globin genes by nonradioactive single-strand conformation polymorphism. Brazilian Journal of Medical and Biological Research, v. 36, n. 11, p. 1471-1474, Nov. 2003.
Publicações acadêmicas
(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)
JORGE, Simone Bordignon de. Otimização da tecnica de SSCP (Single Strand Conformation Polymorphism) para triagem de mutações nos genes da globina [alfa] humana. 2002. Dissertação de Mestrado - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências Médicas.

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