Avaliação da estabilidade da forma dimérica na atividade danificadora de membranas Ca+2 independente de bothropstoxina-I da serpente Bothrops jararacussu

• Processo: 98/14686-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 1999
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2001
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica
• Pesquisador responsável: Richard John Ward
• Beneficiário: Roberto Ruller
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 96/11165-3 - Investigação da relação entre estrutura e função em fosfolipase lisina 49, AP.JP
• Assunto(s): Fosfolipases A2
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Engenharia De Proteinas | Espectrofluorescencia | Fosfolipases | Interacao Proteina Membrana | Mutagenese Sitio Dirigida

Resumo

As fosfolipases A2 (PLA2s) catalisam a hidrólise de pontes ácido-éster na posição sn-2 dos fosfolipídeos. Um sub-grupo das fosfolipases dimericas, as PLA2-Lys49 não apresentam atividade catalítica, mas danificam membranas por um mecanismo Ca2+- independente. Pretendemos usar a botropstoxina-I da B. jararacussu como um sistema modelo para avaliar a hipótese que mudanças na estrutura quaternária de PLA2-Lys49 são a base estrutural desta função, usando métodos de mutagênese sítio-dirigida para gerar mutantes da proteína na região da interface dimérica. A estabilidade do dímero e a atividade da proteína recombinante em interação com membranas artificiais serão analisadas através de técnicas de espetro-fluorescência (supressão e anisotropia). Os resultados serão interpretados na base da importância da forma dimérica na atividade Ca2+ independente dos PLA2-Lys49. (AU)

Publicações científicas

(4)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

CHIOATO‚ L.; DE OLIVEIRA‚ A.H.C.; RULLER‚ R.; SÁ‚ J.M.; WARD‚ R.J.. Distinct sites for myotoxic and membrane-damaging activities in the C-terminal region of a Lys49-phospholipase A2.. Biochemical Journal, v. 366, n. Pt 3, p. 971, 2002. (96/11165-3, 98/14686-0, 98/14569-3, 98/14568-7, 97/14370-0)

SÁ‚ J.M.; CHIOATO‚ L.; FERREIRA‚ T.L.; DE OLIVEIRA‚ A.H.C.; RULLER‚ R.; ROSA‚ J.C.; GREENE‚ L.J.; WARD‚ R.J.. Topology of the substrate-binding site of a Lys49-phospholipase A2 influences Ca2+-independent membrane-damaging activity. Biochemical Journal, v. 382, n. Pt 1, p. 191, 2004. (96/11165-3, 00/11165-0, 98/14686-0, 01/06388-3, 98/14569-3)

WARD‚ R.J.; CHIOATO‚ L.; DE OLIVEIRA‚ A.H.C.; RULLER‚ R.; SÁ‚ J.M.. Active-site mutagenesis of a Lys49-phospholipase A2: biological and membrane-disrupting activities in the absence of catalysis.. Biochemical Journal, v. 362, n. Pt 1, p. 89, 2002. (96/11165-3, 98/14686-0, 98/14569-3, 98/14568-7, 97/14370-0)

RULLER‚ R.; ARAGAO‚ EA; CHIOATO‚ L.; FERREIRA‚ T.L.; DE OLIVEIRA‚ AHC; SA‚ JM; WARD‚ RJ. A predominant role for hydrogen bonding in the stability of the homodimer of bothropstoxin-I‚ A lysine 49-phospholipase A₂. Biochimie, v. 87, n. 11, p. 993-1003, 2005. (96/11165-3, 00/11165-0, 98/14686-0, 01/06388-3, 98/14569-3)