Construção de um sistema de produção retroviral indutível por temperatura

• Processo: 01/11674-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2002
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2004
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Bryan Eric Strauss
• Beneficiário: Marcio Chaim Bajgelman
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 00/12156-5 - Estratégias de regulação transcricional em produção e expressão de retrovírus, AP.JP
• Assunto(s): Biotecnologia Retroviridae Ensaio clínico
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biotecnologia | Pcl | P53 | Retrovirus | Transferencia Genica

Resumo

O retrovírus é largamente utilizado como ferramenta de transferência gênica em ensaios de laboratório e protocolos clínicos. Um fator de extrema importância para a utilização bem sucedida de vetores retrovirais consiste na produção de uma preparação de vírus de alto título, sob condições que protejam a integridade do vírus e das células produtoras. Genes citotóxicos e citostáticos codificados pelo vírus, tais como os supressores de tumor, são expressos nas células produtoras, podendo alterar seu crescimento, e comprometendo a produção viral. Estes efeitos deletérios ocasionam uma pressão seletiva que pode resultar em mutação ou deleção do gene codificado no vírus. Neste projeto, apresentamos a proposta de um sistema indutível, onde a produção viral é "desligada" a 37ºC, evitando os efeitos negativos dos genes codificados no vírus, e "ligada" somente quando é desejada a produção de vírus, bastando-se alterar a temperatura de incubação das células produtoras para 32ºC. O mecanismo idealizado para o sistema indutível, será construído modificando-se o retrovírus pCL, de forma que sua expressão nas células empacotadoras dependerá exclusivamente de p53, um potente fator de transcrição. Utilizaremos um conhecido mutante de p53, sensível a temperatura, que fornecido em "trans" ativará a transcrição do pró-vírus, direcionando a expressão viral. (AU)