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Trealases do tubo digestivo de "Spodoptera frugiperda" (Lepidoptera)

Processo: 00/13379-8
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Vigência (Início): 01 de março de 2001
Vigência (Término): 28 de fevereiro de 2003
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
Pesquisador responsável:Clelia Ferreira Terra
Beneficiário:Maria Cicera Pereira da Silva
Instituição-sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:98/10458-2 - A digestão nos insetos: uma abordagem molecular, celular, fisiológica e evolutiva, AP.TEM
Assunto(s):Trealase   Enzimas digestivas

Resumo

As trealases são enzimas muito específicas para trealose (glicose alfa 1,1 glicose) e que em insetos desempenham um papel crucial no metabolismo. De um modo geral as trealases tiveram suas propriedades pouco estudadas. Em nenhum organismo a trealase foi estudada a ponto de se conhecer, por exemplo, quais são exatamente os aminoácidos envolvidos em catálise. Há dúvidas também sobre como é organizado o seu sítio ativo e qual o papel de certos grupos detectados nas suas cercanias. Em insetos somente trealases solúveis foram estudadas, embora uma trealase ligada às membranas de enterócitos de Lepidoptera e de mitocôndria de células musculares já tenha sido descrita. Nosso objetivo é purificar e caracterizar cineticamente as trealases solúveis e de membrana presentes no tubo digestivo da larva de Spodoptera frugiperda, uma praga de plantações de milho. Após serem purificadas as enzimas terão seu pH ótimo, kcat e km determinado. A seguir serão feitos experimentos de inibição por várias substâncias e os inibidores competitivos serão utilizados para realização de experimentos de inibição múltipla, que podem dar uma idéia uma idéia da regionalização existente no sítio ativo. Experimentos de modificação química na presença e na ausência do substrato ou inibidores competitivos serão realizados para detectar os grupos presentes no sítio ativo ou em sua vizinhança. Caso ainda seja possível dentro desse projeto, tentarmos identificar os aminoácidos envolvidos em catálise. (AU)