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Caracterização estrutural e funcional e uma proteinase tiolica de frutos de bromélia fastuosa: análise funcional e estrutural comparativa com papaína e bromelinas

Processo: 01/03912-3
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de julho de 2001
Vigência (Término): 30 de junho de 2005
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Biofísica
Pesquisador responsável:Gustavo Orlando Bonilla Rodriguez
Beneficiário:Hamilton Cabral
Instituição-sede: Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas (IBILCE). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José do Rio Preto. São José do Rio Preto , SP, Brasil
Assunto(s):Cristalização   Proteinases   Bromelaínas   Cinética enzimática   Papaína

Resumo

Durante a execução do projeto pretendemos dar continuidade ao trabalho executado durante o mestrado defendido em 21/3/2001 relativo a uma enzima de frutos de gravata, denominada por nós de brofasina. Em termos estruturais: 1) completaremos a determinação da seqüência primária da proteinase, 2) determinaremos a seqüência do gene codificador, 3) tentaremos a cristalização e resolução da estrutura, 4) estudaremos o efeito de glicosaminoglicanos e agentes tiólicos sobre a estrutura secundária, 5) estudaremos a desnaturação por uréia. Os itens 4 e 5 serão analisados por dicroismo circular. Se as tentativas de cristalização não forem bem-sucedidas tentaremos estabelecer colaboração para execução de RMN. No que se refere aos aspectos funcionais 1) faremos o mapeamento dos subsídios do sítio ativo, 2) determinaremos os parâmetros cinéticos de formação e desdobramento do complexo ES , 3) o efeito de glicosaminoglicanos sobre a atividade funcional. Como objetivos secundários tentaremos a cristalização das bromelinas do abacaxi (Ananas comosus) e a clonagem do gene da brofasina. Ao longo do projeto nossos referenciais de estrutura e função serão a papaína, que dá origem à família de proteinases à qual a enzima pertence, e as bromelinas do abacaxi, cuja seqüência é próxima da obtida parcialmente para a brofasina. O trabalho será co-orientado pelo Professor Dr. Luiz Juliano Neto da UNIFESP. (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
CABRAL, H.; LEOPOLDINO, A. M.; TAJARA, E. H.; GREENE, L. J.; FACA, V. M.; MATEUS, R. P.; CERON, C. R.; SOUZA JUDICE, W. A. DE; JULIANO, L.; BONILLA-RODRIGUEZ, G. O. Preliminary functional characterization, cloning and primary sequence of Fastuosain, a cysteine peptidase isolated from fruits of Bromelia fastuosa. PROTEIN AND PEPTIDE LETTERS, v. 13, n. 1, p. 83-89, Jan. 2006.
Publicações acadêmicas
(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)
CABRAL, Hamilton. Análise funcional e estrutural comparativa da fastuosaina com papaína e bromelinas. 2005. 150 f. Tese de Doutorado - Universidade Estadual Paulista. Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas. São José do Rio Preto.

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