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Clonagem, estudo da localização subcelular e expressão da protease homóloga a FtsH bacteriana em cana-de-açúcar

Processo: 00/03348-8
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de junho de 2000
Vigência (Término): 31 de março de 2004
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Márcio de Castro Silva Filho
Beneficiário:Phellippe Arthur Santos Marbach
Instituição-sede: Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (ESALQ). Universidade de São Paulo (USP). Piracicaba , SP, Brasil
Assunto(s):Cana-de-açúcar   Mitocôndrias

Resumo

Em eucariotos, proteínas com homologia à protease bacteriana FtsH, estão envolvidas em importantes processos celulares como fosforilação oxidativa, fotossíntese, biogênese de plastídeos e degradação de fatores de transcrição. Em plantas, as proteases FtsH identificadas até o momento, estão localizadas em plastídeos, Porém, em levedura, estas proteases foram encontradas em mitocôndrias, sugerindo a existência destas proteases também em mitocôndrias de plantas, pois elas são altamente conservadas estrutural e funcionalmente. Recentemente, um cDNA que codifica para a protease FtsH foi parcialmente clonado pelo projeto SUCEST (FAPESP). Neste projeto propomos concluir a clonagem deste cDNA, e estudar a localização sub-celular e a expressão desta protease em cana-de-açúcar. Para estudar a localização sub-celular da FtsH, construções gênicas envolvendo o cDNA da FtsH e a proteína repórter GFP (Green Fluorescent Protein) serão introduzidas em protoplastos de tabaco via eletroporação. A localização subcelular de GFP será feita por meio de microscopia de fluorescência ou confocal. A expressão de FtsH será estudada por meio de Northern e Western Blot a partir do RN£ e proteína total, extraídos de tecidos de cana-de-açúcar em diferentes estágios de desenvolvimento, e, também sob estresse fotooxidativo. Estes estudos permitirão determinar a localização sub-celular, a especificidade do direcionamento da FtsH, bem como, sua expressão durante o desenvolvimento da cana-de-açúcar. (AU)

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